miR-26b联合TAF12负性调控Wnt信号通路APC基因对大肠癌发生及发展的作用机制研究

In our pre-study we found that miR-26b played a significant tumor suppressor role in colorectal cancer in vitro and transplanted into nude mice. But in the starting stage of animal, it is yet to study that miR-26b whether affects the occurrence and development of colorectal cancer by target the gene TAF12 expression, and whether TAF12 is involved in the Wnt/APC/beta-catenin, the corresponding signal transduction pathways, plays a role. This project will establish a mouse model by transgenic technology in the gene level of colorectal cancer which miR-26b plays a tumor suppressor. And by using chemicals induced colorectal cancer to make chemical carcinogenesis mouse model for the anticancer effects of miR-26b, Also to explore the mechanisms for target gene TAF12 of fetal endogenous miR-26b and the Wnt/APC signaling pathways to inhibit the development of colorectal cancer, further to clear the role of miR-26b in colorectal carcinogenesis and the development process, variation of precancerous lesions such as adenoma, adenocarcinoma, and some poorly differentiated adenocarcinoma, liver metastasis. The study is of great significance to clarify the incidence of colorectal cancer development mechanism, and has important reference value for clinical targeted therapy.

在课题组前期研究中发现肿瘤胎源性miR-26b对大肠癌体外细胞及裸鼠皮下移植瘤具有显著抑癌作用，但从发育起始及肿瘤原发阶段开始，miR-26b是否能起作用影响大肠癌发生及发展，是否存在联合靶基因TAF12参与Wnt/APC/β-catenin肠癌经典信号转导通路起作用尚需研究。本课题通过转基因技术建立"大肠癌基因水平miR-26b抑癌小鼠模型"研究miR-26b的抑癌作用，并利用化学药物诱导建立"大肠癌化学诱癌-miR-26b原发小鼠模型"研究miR-26b的抗癌作用，探索胎源性miR-26b及其靶基因TAF12与APC相关Wnt信号通路作用对大肠癌发生发展的影响及其机制，进一步明确miR-26b在大肠癌发生、发展过程中，包括癌前病变如大肠腺瘤，腺癌和部分低分化腺癌，肝脏转移的变化规律，对阐明大肠癌的发生发展机制具有重要意义，对临床靶向干预具有重要参考价值。

在课题执行过程中，鉴于miR-26b在大肠癌组织中相对癌旁组织及正常肠道粘膜上皮组织表达量较低，且miR-26家族中有miR-26a、miR-1297及miR-4465等相近序列的其他miRNA，通过miRNA mimics干预作用实验易受背景RNA及检测标本中miRNA表达量的影响，本着既定的miRNA干预大肠癌肿瘤进展作用的研究思路及方法，及利用miRNA的调控作用，通过分别同时研究在肠癌中复合低表达趋势miRNA对肠癌发生发展的影响，在执行本课题的过程中，决定重点聚焦在大肠癌组织中相同表达规律、且族系单一的miR-150，采用同样的研究思路方法检测并验证miR-150通对大肠癌的调控作用，并进一步研究miR-150是否可调控大肠癌关键信号通路，从而影响大肠癌发生发展的分子机制。以miR-150为作为活性药物成分，利用组氨酸-赖氨酸聚合物作为体内优势载体，研究并开发基于miR-150的药物用于大肠癌的特异性靶向治疗。研究采用4周龄BALB/c裸鼠在无特殊病原菌环境下经1周的环境适应期后，取对数生长期的人大肠癌细胞系LoVo细胞用于皮下移植，将裸鼠随机分成6组。将药物制剂注射入肿瘤组织，每两天注射一次药物，连续治疗9次。研究发现给药结束后，发现除了miRNA-150 治疗组，其它各组都呈现和未治疗控制组相似的生长趋势，而miRNA-150 治疗组的肿瘤生长显著减缓。从第七次治疗开始，肿瘤生长明显被抑制；定量RT-PCR检测肿瘤组织中靶向微核酸表达水平，结果显示HKP-miR-150治疗组靶向微核酸表达显著高于其它组别；检测经过治疗的肿瘤组织，发现增殖细胞核抗原在HKP-miR-150 mimics治疗组中，与其它对照组和未治疗有显著差别，经过HKP-miR-150 mimics药物治疗的肿瘤组织中的PCNA细胞核大量减少，提示肿瘤细胞死亡；使用经典细胞程序化死亡检测的TUNEL法，检测经过治疗的肿瘤组织， HKP-miR-150 mimics治疗组与其它对照组和未治疗组有显著差别，经过HKP-miR-150 mimics药物治疗的肿瘤组织中的TUNEL 细胞核大量增加，提示治疗诱导肿瘤细胞程序性死亡。