Atg12介导的树突状细胞自噬在胸腺瘤合并重症肌无力中的作用与机制研究

Thymoma is a high incidence of disease, the vast majority of patients with myasthenia gravis (MG). And the disease lack of effective drug treatment due to the exact of pathogenesis is unknown. Our previous study found that the amount of dendritic cell(DC) increased, and observed the increased expression of Atg12 and LC3B,and decreased expression of P62 in tumor infiltrating dendritic cell, in the patients of thymoma with MG.It indicated that thymoma can cause DC autophagy and participate in the pathogenesis of MG,but the mechanism of thymoma causing DC autophagy is unknown.Studies have found that autophagy plays an important role in DC antigen presenting, Atg12 is an important factor in the formation of autophagic vacuole and the appearance of autophagic vacuole is the critical process of the autophagy. Accordingly,we speculate that the occurrence of thymoma can stimulate Atg12 raised in DC, causing DC autophagy and resulting in MG. This paper intends to study the mechanism of DC autophagy in thymoma with MG on the basis of preliminary work, finding the role of Atg12 in autophagy and antigen-presenting function of DC in vitro cellular level based on high expression and low expression of Atg12 in DC, while establishing Atg12 knockout C57BL/6 EAMG model, finding the role of Atg12 in Th17 cells balance of the peripheral blood. We hope this study can provide a theoretical basis and clinical evidence for resolving the molecular mechanism of thymoma with MG.

胸腺瘤发病率高，绝大多数患者合并重症肌无力（MG），但其具体发病机制不详，临床缺乏有效的药物治疗手段。本课题组前期研究发现：胸腺瘤合并MG患者树突状细胞（DC）增加，DC中Atg12、LC3B表达升高、P62表达降低，说明胸腺瘤可引起DC自噬并参与MG发生，但胸腺瘤引起DC自噬的机制并不清楚。有研究发现：自噬在DC抗原提呈过程中发挥重要作用，Atg12参与形成的吞噬泡是自噬发生的关键过程。据此，我们推测：胸腺瘤可刺激DC中Atg12上调，引起DC自噬，导致MG发生。本课题拟在前期工作基础上研究DC自噬在胸腺瘤合并MG中的机制，以高表达和低表达Atg12的DC为基础，体外细胞学水平探索Atg12对DC自噬和抗原提呈功能的影响，同时建立Atg12敲除的C57BL/6 EAMG模型，研究Atg12在Th17细胞平衡中的作用。通过上述研究，为解析胸腺瘤合并MG发病的分子机制提供理论基础与临床依据。

背景：胸腺瘤的发生改变了胸腺微环境，可能间接影响了树突状细胞Atg12基因的表达，Atg12作为自噬关键基因可以促进自噬提高树突状细胞的抗原提呈能力，进而提高MHCⅡ的表达水平并过度活化T细胞。因此，树突状细胞Atg12水平的改变可能是诱发胸腺瘤合并重症肌无力的原因之一。.目的：通过临床标本验证胸腺瘤合并MG患者较单纯胸腺瘤患者的树突状细胞自噬水平升高。建细胞模型，证明胸腺瘤的发生可间接升高树突状细胞内Atg12的表达，从而促进树突状细胞自噬，提高DC抗原提呈能力，诱发MG。.方法：选取单纯胸腺瘤（T）和胸腺瘤合并重症肌无力（T+MG）患者的术后肿瘤组织标本。应用免疫组化及多色免疫荧光检测树突状细胞表面标记物以及自噬相关蛋白及Atg12的共表达水平。THP-1细胞系稳定诱导分化出DC，通过转染手段在DC中上调及下调Atg12的表达，检测DC自噬蛋白的改变，同时构建人胸腺瘤细胞系Thy0517与DC共培养体系，验证DC自噬的变化与Atg12相关。.结果：胸腺瘤合并重症肌无力患者与单纯胸腺瘤患者相比，成熟与非成熟的树突状细胞均增加，同时DC的自噬水平升高。另外DC自噬水平的变化与Atg12的表达呈正相关。将胸腺瘤细胞Thy0517与DC共培养，当改变胸腺瘤细胞的Atg12水平，其微环境中DC的Atg12及自噬水平也会产生相同的变化趋势。.结论及意义：胸腺瘤发生后胸腺上皮细胞自噬增强，当达到一定程度后，胸腺微环境中的树突状细胞的Atg12表达升高，树突状细胞的自噬也增强，其抗原提呈能力亦随之加强。胸腺瘤合并MG患者较单纯胸腺瘤患者的DC增多且自噬增强也印证了胸腺瘤导致的树突状细胞自噬与重症肌无力之间的密切关系。本研究进一步从免疫学角度拓宽了对重症肌无力发病机制的认识，为深入探索胸腺瘤合并重症肌无力的分子机制奠定了基础，进而为临床实践提供更多有益的治疗思路和可能的方案。