草药隔山香苯丙素类成分及其对平滑肌细胞钙通道作用的研究

Angelica citriodora Hance is an endemic and traditional herbal in China, which has the function on relieving pain by promoting qi circulation and removing blood stasis by promoting blood circulation. In clinic, it possess the significant effect on treating these diseases caused by smooth muscle contraction, such as angina pectoris, stomach pain, abdominal pain, and so on. However, it is not clear about the material basis of pharmacodynamics.We found that the phenylpropanoid ingredients in Angelica citriodora Hance own obviously effect on relaxing the smooth muscle of the multi-organ in the body. Preliminary studies have shown that the action mechanism is related on influencing the intracellular calcium concentration. On the basis of above, the research is going to tracking and separating the phenylpropanoid ingredients by adopting the method of activity determination in vitro combined with quick analysis detection using HPLC-DAD-ESI-MS-MS. Moreover, it will be finished that to evaluate the absorption result and the effect on relieving spasm of smooth muscle, to assess the impact on the Ca2+ channels of smooth muscle using patch clamp technique, to observe the intervention on the intracellular calcium concentration using laser scanning confocal microscope and to determinating the influence on enzymes and receptors in signal transduction pathways of cell contraction. Through this research, it would be clarified that the mechanism of relieving spasm，scientific connotation of "xingqizhitong" and structure-activity relationship about Angelica citriodora Hance. As a result, the available evidence would be obtained about resource exploitation of Angelica citriodora Hance and new drug development on calcium antagonists.

草药隔山香是我国特有植物，具有行气止痛等功效，临床上多用于治疗因平滑肌痉挛引起的心绞痛、胃痛、腹痛等疾病，疗效显著，但相关药效物质基础及作用机制并不清晰。我们研究发现，隔山香中的苯丙素类成分具有明显舒张体内多器官平滑肌尤其是胸主动脉平滑肌的作用；初步的作用机制研究显示，其舒张平滑肌作用主要与影响细胞内钙浓度有关。本课题拟在以上基础上，采用体外活性测定结合HPLC-DAD-ESI-MS-MS快速分析检测，追踪和分离隔山香中苯丙素类成分及入血成分；测定化合物的口服吸收效果及对平滑肌的解痉作用；运用膜片钳技术研究其对平滑肌钙通道的影响，采用激光扫描共聚焦显微镜观察其对细胞内钙浓度的干预，测定其对细胞收缩信号传导过程相关酶和受体的影响，阐明其解痉机制；探讨苯丙素类成分构效关系。以上研究可揭示隔山香"行气止痛"的科学内涵，为民族药的传承、中药新资源的发现与开发、钙拮抗新药的研制提供实验支持。

草药隔山香治疗因平滑肌痉挛而引起的心绞痛、胃痛以及腹痛等疾病的药效物质基础及作用机制不清晰。本课题分别考察隔山香不同极性部位对大鼠主动脉血管环舒张的影响；对有效部位开展植化分离鉴定，对分离成分进行药效活性验证，对有效成分开展作用机理研究；采用LC-MS/MS方法，检测隔山香口服给药后的入血成分，开展了隔山香活性成分异芹菜脑在大鼠中的药物动力学研究；此外，课题还初步探讨了隔山香挥发油不同给药途径对小鼠的止泻作用研究。研究结果显示，隔山香不同极性部位对含内皮离体大鼠胸主动脉血管环具有舒张作用，其中乙酸乙酯、石油醚部位效果尤为明显；石油醚部位中主要成分异芹菜脑对血管的舒张作用呈现对内皮依赖性；异芹菜脑可促进VEC合成释放NO，并能提高eNOS的表达，提示其可能通过促进NO的释放使血管舒张；异芹菜脑对VSMC增殖有双向调节作用。从乙酸乙酯部位分离鉴定10个化合物，主要为苯丙素类；其中三个为新的天然产物，其中异紫花前胡内酯及异莳萝脑乙二醇均能浓度依赖性舒张NE以及KCl预收缩的内皮完整或内皮去除的血管（P<0.05），且内皮完整组与内皮去除组均无明显差异，对静息状态下血管张力无影响，还能使氯化钙量效曲线显著下移（P<0.05）；以维拉帕米、TEA预孵后异紫花前胡内酯及异莳萝脑乙二醇血管舒张作用有所降低（P<0.05）；不同浓度的异紫花前胡内酯及异莳萝脑乙二醇预孵血管平滑肌细胞后，KCl、NE及CaCl2诱导的细胞荧光密度值明显降低。隔山香正丁醇萃取部位对血管的舒张作用呈现非内皮依赖性，且其作用具有一定的浓度依赖性；隔山香正丁醇萃取部位可以抑制KCl、NE、TG诱导的血管平滑肌细胞内钙的升高；从中分离的化合物Ⅰ、Ⅱ对血管无舒张作用，提示化合物Ⅰ、Ⅱ不足以代表正丁醇萃取部位的活性。本课题还开展了药材中活性成分异芹菜脑和异莳萝脑乙二醇的定性定量质控研究。隔山香挥发油口服给药后，在大鼠血浆中检测出异芹菜脑，且响应值最大；异芹菜脑在大鼠体内的药物动力学方法学考察符合要求，获得了其主要药动学参数，其药时曲线呈双峰现象。隔山香挥发油口服和外用给药对番泻叶和蓖麻油引起的小鼠腹泻均有显著的抑制作用。本课题明确了隔山香不同部位和成分舒张血管平滑肌的活性及特点，体现了中草药“多成分、多机制”的作用特点，研究成果阐释了隔山香“行气止痛”的药效物质及机制，为其临床应用和资源开发提供了依据。