rFVIIa对颅脑创伤后的止血和神经保护作用及机制的研究

Studies showed the use of rFVIIa could decreased hematoma growth following spontaneous intracerebral hemorrhage. Our previous study found high dose rFVIIa could limit the expanson of cerebral contusion and neuroprotection of neurons and axons.The question is if rFVIIa can limit intracerebral bleeding and neuroprotection? This experimental design is different dose of rFVIIa were used in the TBI model in the pig, and evaluate the effects of limiting the expansion of cerebral contusion and intravascular thrombosis to confirm the effect of neuropretection. The mechanisam of neuroprotective effects of rFVIIa was explored. Neuron injury in the cell culture were applied rFVIIa. The neuroprotective effects in the hippocampus after TBI in the rats were also evaluated.The appotosis、neurogensis and neurotrophic factors were also evaluated. The indirect mechanism of neuroprotection was explored by evaluating the blood serum、IgG in the brain 、thrombin and PAR1.

研究表明rFVIIa能够在自发性脑出血急性期控制脑内血肿扩大，但对颅脑创伤的作用尚无定论。前期实验发现大剂量rFVIIa可以限制外伤后脑挫裂灶扩大并保护神经元和轴索。rFVIIa是否既能颅内止血又具神经保护功能？本课题拟应用不同剂量rFVIIa在猪脑挫裂伤模型中，观察其限制脑挫裂灶扩大的作用和体内血栓形成的影响，以评估rFVIIa的止血效果和安全性，并明确rFVIIa的神经保护作用；探讨rFVIIa的神经保护机制：利用培养神经元损伤模型及作用rFVIIa后,观察神经元存活率；利用大鼠脑挫伤模型，观察rFVIIa对海马神经元的保护，以确定rFVIIa是否对神经元和轴索具有直接保护；并从细胞凋亡、神经再生和神经营养因子等方面探讨其机制。通过分析动物血清、CSF和脑组织中IgG、凝血酶和rFVIIa的含量及PAR1的表达和分布，探讨间接保护途径。

根据课题年度计划，首先完成了动物损伤实验模型的建立。前期实验证实TF作为诱发rFVIIa神经保护作用的重要因素，其在脑组织内的表达至关重要。但是课题组经过多次实验均未检测到TF在脑组织内的表达，因此，课题组认为原实验计划无法正常完成。基于以往的经验，课题组发现多聚非饱和脂肪酸（PUFAs）对颅脑创伤后神经功能的修复及白质损伤的减少有显著的作用，因此，课题组转而研究DHA和EPA在颅脑创伤后对继发性炎症因子反应，神经纤维变性，尤其是神经轴索脱髓鞘的逆转及修复等方面的作用。初步结果提示：DHA+EPA等多聚非饱和脂肪酸（PUFAs）具有一定的神经保护作用，下一步还将进行神经纤维变性后脱髓鞘逆转和修复方面的研究。同时，课题组还进行了颅脑创伤后血脑屏障破坏，血管通透性增加而导致的血管源性脑水肿的初步机制研究，结果提示：BzATP可以破坏人脑微血管内皮细胞紧密连接，是启动继发性脑损伤的因素之一，而IL-1β、MMP-9可能是这个通路上的重要环节或调节点，加以干预可减轻血管内皮细胞紧密连接的破坏，从而减轻外伤后脑水肿。