AnnexinA7调控Sorcin表达及促进肝癌上皮间质转化的机制研究

Metastasis is one of the typical features of malignancy that significantly increases the mortality, however the exact molecular mechanisms still need further study. AnnexinA7 (Anxa7) is a member of Ca(2+)-binding intracellular proteins associates with carcinogenesis and metastasis. Our preliminary experiments have shown that Anxa7 functioned as a promoter in metastasis of HCC. We found Anxa7 is involved in EMT, and closely related to Sorcin, which is also a protein marker of tumor malignant attributes. Our current study is to investigated its possible molecular mechanisms of Anxa7 in the hepatocarcinoma metastasis, we employed PLA, an emerging technique to detect Anxa7 and Sorcin interactions with high specificity and sensitivity in situ, and IHC and WB was performed to detect EMT-associated protein expression. The results of these studies will inform our understanding of the mechanisms that Anxa7 plays in metastasis ,which maybe provides novel prognostic information and opens a significant novel opportunity to probe the clinical impact of AnnexinA7 in HCC.

肝癌转移是肝癌患者死亡的首要原因，但有关肝癌转移的具体分子机制至今仍尚未明确。AnnexinA7 (Anxa7)是钙离子依赖性膜联蛋白，与多种肿瘤发生及转移密切相关。本课题组前期通过筛选验证发现Anxa7是肝癌转移促进因子，通过调控Anxa7表达，发现Anxa7参与上皮间质转化过程（EMT），而此过程与抗药蛋白Sorcin密切相关。本项目拟在此基础上，通过细胞实验，小鼠实验和临床标本进一步探求Anxa7在肝癌转移中发挥作用的具体分子机制，采用邻位连接技术（PLA）结合激光共聚焦显微镜在生理状态下对Anxa7与Sorcin的相互作用进行可视化定量检测，采用免疫组化、Western blotting等检测EMT相关标志物的变化，以期证明Anxa7可能是通过与Sorcin相互作用，参与EMT过程，进而促进肝癌转移。为Anxa7促进肝癌转移的分子地位提供新的理论依据，为肝癌转移治疗提供潜在靶点。

肝细胞性肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，且其发病率逐年上升。HCC具有高度侵袭性，往往早期就出现转移，是目前肝癌患者死亡的直接原因。肝癌转移的分子机制复杂且尚未完全明确。上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）是具有上皮特征细胞在特定的生理和病理情况下向具有间质特征细胞转化的现象，与肿瘤的侵袭转移等密切相关，目前多数研究认为EMT是促使肿瘤早期转移的关键环节。因此，研究促进肝癌细胞发生上皮间质转化的相关分子机制，对控制肝癌细胞的转移具有十分重要的意义。.本课题主要研究内容：1.观察ANXA7与Sorcin在人正常肝细胞/组织与人肝癌细胞/组织中的表达情况。2.证明ANXA7与Sorcin存在相互作用，二者为相互作用蛋白。3.调控ANXA7表达，分别检测Sorcin与EMT相关指标在蛋白和mRNA水平的表达情况；调控Sorcin表达，分别检测ANXA7与EMT相关指标在蛋白和mRNA水平的表达情况。4.体内实验ANXA7表达改变影响移植瘤的生长和上皮间质转化。.主要实验结果：1.ANXA7与Sorcin在人肝癌细胞/组织的表达高于其在人正常肝细胞/组织中的表达。2.ANXA7与Sorcin为相互作用蛋白：3. ANXA7与Sorcin相互作用促进上皮间质转化：①ANXA7对Sorcin的调控参与EMT进而促进肝癌增殖、侵袭和迁移；②Sorcin对ANXA7的调控参与EMT进而促进肝癌增殖、侵袭和迁移。4.体内实验A7表达改变影响移植瘤的生长和上皮间质转化。ANXA7的表达降低时，Sorcin的表达也会减少，而E-cadherin与Cytokeratin的表达量增多，同时N-cadherin与Vimentin的表达量降低；ANXA7的表达升高时，Sorcin的表达也会增多，而E-cadherin与Cytokeratin的表达量减少，同时N-cadherin与Vimentin的表达量增多。.本课题为Anxa7促进肝癌转移的分子机制提供新的理论依据，为肝癌转移治疗提供潜在靶点。