在HTLV-1病毒感染的T细胞中Bcl3-NFκB-Tax蛋白关系的研究

目前对于成人T细胞白血病（ATL）的发病机制尚不清楚，大多数学者认为HTLV-1感染的T细胞中，病毒Tax蛋白使NFκB持续活化是重要的原因。我们通过基因芯片、定量PCR和激光共聚焦显微镜等技术研究表明，在T细胞中Tax蛋白促进Bcl3和p65的表达和向细胞核转移，能够对抗NFκB抑制剂的作用。已知Bcl3和NFκB关系密切，那么Bcl3在ATL发病机制中起什么作用呢？.本项目拟采用RNAi、Western Blot、EMSA、荧光素酶报告基因和激光共聚焦显微镜等技术, 对Tax蛋白表达的细胞中Bcl3与NFκB、Tax蛋白之间的关系进行深入研究，以期确定在HTLV-1感染的T细胞中存在着不依赖于Tax蛋白的Bcl3-NFκB正反馈环，及Bcl3对Tax蛋白表达的抑制作用,证明Bcl3是ATL发病机制中的一个关键靶点，其结果将为基于Bcl3靶点的ATL药物开发和基因治疗提供理论依据。

我们前期的研究发现HTLV-1病毒感染的T细胞中Bcl3基因是高表达的，那么这些高表达的Bcl3在HTLV-1病毒引起成人T细胞白血病中的作用是什么？目前尚不清楚。因此，我们在以下几个方面进行了研究：①Bcl3和NFκB通路关系的研究；②在HTLV-1病毒感染细胞中Bcl3与细胞增殖、DNA损伤之间关系的研究；③抗病毒药物、通路抑制剂和HMGB1对HTLV-1病毒感染细胞的影响。结果显示：.1.我们通过siRNA沉默HTLV-1感染细胞内Bcl3基因的表达发现NF-κB活性是降低的，随后我们在细胞培养液中加入NF-κB通路的抑制剂Bay11-7802，发现Bcl3基因的表达也受到抑制，而当T淋巴细胞系-Jurkat E6-1被转染入HTLV-1 Tax蛋白表达载体的时候，Bcl3基因表达和NF-κB活性都是增高的。这些研究显示Bcl3-NFκB正反馈环是存在的。进一步研究发现沉默和过表达Bcl3都能够抑制Tax诱导NF-κB的活化，并且过表达的Bcl3能够抑制NF-κB/DNA的结合能力和减少Tax诱导的p65的核转移。.2.我们继续研究在HTLV-1感染细胞中Bcl3的表达与细胞增殖、DNA损伤和细胞自噬的关系。结果发现HTLV-1 Tax蛋白促进Bcl3表达和核转移。沉默Bcl3后明显诱导DNA损伤，细胞生长和NF-κB 活性降低。Bcl3表达上调和NF-κB通路被抑制，都能促进细胞自噬的发生，同时也证明过表达Bcl3能增强雷帕霉素、p53抑制剂（pifithrin-α）和饥饿诱导的自噬。因此证明在HTLV-1感染的细胞中，Bcl3在DNA稳定、细胞生长和NF-κB活化上具有正性作用，同时Bcl3能促进细胞自噬。.3. 我们还就抗病毒药物FNC和NF-κB抑制剂对HTLV-1感染细胞的影响，以及Sirt1、HMGB1、诱骗受体（DcR3）和早期生长反应基因（EGR-1）与HTLV-1病毒感染细胞之间的关系进行了研究。.总之，本研究证实在HTLV-1感染的细胞中Bcl3-NFκB之间相互影响，还发现沉默和过表达Bcl3都能够抑制Tax诱导NF-κB的活化，并且过表达的Bcl3能够抑制NF-κB/DNA的结合能力和减少Tax诱导的p65的核转移。同时在国际上首次证明Bcl3在HTLV-1感染细胞中能够促进细胞自噬的发生。