大黄酸通过Wnt/beta-catenin信号通路逆转糖尿病肾病足细胞转分化

糖尿病肾病中足细胞早期病变的发生可能和其发生转分化相关。本研究旨在运用大黄酸，从上皮细胞转分化的Wnt/beta-catenin信号通路入手，从动物、细胞水平减少足细胞损伤及凋亡，明确大黄酸在糖尿病肾病治疗中的作用。构建糖尿病肾病小鼠模型，使用大黄酸主动干预足细胞损伤，观察糖尿病小鼠肾组织病理改变、尿蛋白、足细胞数目、标志蛋白、转分化标志蛋白及Wnt/beta-catenin通路蛋白的具体变化。体外培养小鼠足细胞，采用western-blotting、real-time PCR等方法，并通过流式细胞仪，观察糖基化终末产物、高糖、血管紧张素II是否改变小鼠足细胞凋亡率、细胞活性（乳酸脱氢酶的释放量）、足细胞标记蛋白，转分化标志蛋白、Wnt/beta-catenin信号通路及其关键下游调节分子糖原合成酶激酶的具体变化。同时使用大黄酸平行干预小鼠足细胞，观察大黄酸对足细胞保护的具体作用机制。

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)已成为目前终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)的主要基础病之一, 大量研究证实，足细胞数目和密度的下降在糖尿病肾病蛋白尿和肾小球硬化的发生发展中发挥至关重要的作用。本研究旨在运用大黄酸，从上皮细胞转分化的Wnt/β-catenin信号通路入手，从动物、细胞水平研究足细胞损伤及凋亡，明确大黄酸在糖尿病肾病治疗中的作用。构建糖尿病肾病小鼠模型，使用大黄酸主动干预足细胞损伤，观察糖尿病小鼠肾组织病理改变、尿蛋白、足细胞数目、标志蛋白、Wnt/β-catenin通路蛋白的具体变化。体外培养小鼠足细胞，采用western-blotting、real-time PCR等方法，观察高糖是否改变足细胞标记蛋白，Wnt/β-catenin信号通路及其关键下游调节分子糖原合成酶激酶的具体变化。同时使用大黄酸平行干预足细胞，观察大黄酸对足细胞保护的具体作用机制。.db/db小鼠经大黄酸治疗12周后，体重下降，高脂血症被明显纠正，高血糖有所改善，尿白蛋白排泄量减少，病理改变也明显减轻。大黄酸干预可下调db/db小鼠引起的肾皮质wnt/β-catenin通路蛋白(wnt1、pGSK‐3β/tGSK‐3β（磷酸化 GSK-3β/总 GSK-3β）及 p-β-catenin/tβ-catenin(磷酸化β-catenin/总β-catenin）比值的表达，尤其是减少了磷酸化wnt通路蛋白表达，提高nephrin 、PPAR-γ表达。经高糖刺激后，小鼠足细胞形态发生改变，wnt/β-catenin通路蛋白表达上调 (P<0.05 ) ，48 h 较24 h 升高明显，表现为时间依赖。大黄酸可明显下调高糖刺激引起的足细胞wnt/β-catenin通路蛋白表达 (P<0.05 ) 。.体内外实验验证可知，大黄酸干预治疗可以明显改善db/db小鼠糖尿病肾病的损害，抑制高糖环境下的wnt/β-catenin通路蛋白表达，这可能是大黄酸防治DN的作用机制之一。