Nogo-B调控肺泡巨噬细胞募集在急性肺损伤中的作用及机制研究

肺泡巨噬细胞（AM）的募集在ALI/ARDS的发生、发展中起关键作用。研究发现Nogo-B通过调控单核/巨噬细胞的粘附和迁移而在炎症及组织损伤修复中发挥重要作用。我们的预实验提示Nogo-B极有可能参与了ALI的病理生理过程。本研究拟以ALI小鼠模型及小鼠巨噬细胞株（RAW264.7）为研究对象，分别采用基因敲除、腺病毒转染、siRNA干扰、小鼠骨髓移植等技术，观察调控Nogo-B表达对ALI小鼠肺脏AM的募集、肺组织炎症和损伤程度以及存活率等的影响；在此基础上，进一步在体外观察调控Nogo-B表达对巨噬细胞粘附、迁移、炎症因子分泌及跨上皮迁移能力等的影响，并探讨其分子机制。以期证实Nogo-B通过调控肺泡巨噬细胞的肺部募集，而参与ALI的发生、发展过程，并力求阐明其在ALI形成中作用及其地位，为ALI/ARDS的预防及早期救治提供新的思路。

肺泡巨噬细胞（AM）的募集在ALI/ARDS的发生、发展中起关键作用，研究发现Nogo-B通过调控单核/巨噬细胞的粘附和迁移而在炎症及组织损伤修复中发挥重要作用。预实验提示Nogo-B极有可能参与了ALI的病理生理过程。本研究内容为观察ALI/ARDS小鼠肺组织及肺泡巨噬细胞的Nogo-B表达变化，调控Nogo-B表达对ALI/ARDS小鼠肺部炎症及损伤程度的影响，探讨Nogo-B表达对ALI/ARDS小鼠肺泡巨噬细胞募集的影响，以及研究Nogo-B表达对ALI/ARDS小鼠肺泡巨噬细胞募集存在的分子通路，以初步阐明Nogo-B调控单核/巨噬细胞募集的可能机制。本实验以ALI小鼠模型及小鼠巨噬细胞株（RAW264.7）为研究对象，分别采用基因敲除、腺病毒转染、siRNA干扰，观察调控Nogo-B表达对ALI小鼠肺脏AM的募集、肺组织炎症和损伤程度以及存活率等的影响；在此基础上，进一步在体外观察调控Nogo-B表达对巨噬细胞粘附、迁移、炎症因子分泌及跨上皮迁移能力等的影响，并探讨其分子机制。研究结果发现小鼠肺组织Nogo-B蛋白表达随肺损伤病情进展而逐渐降低，于第12h降至最低，此外，Nogo-B高表达组小鼠生存时间延长，肺组织损伤程度减轻，肺泡灌洗液蛋白定量检测示蛋白渗出减少，肺微血管通透性降低提示Nogo-B在LPS诱导的急性肺损伤小鼠模型的病情发生、发展中发挥保护作用。在基因敲除小鼠中，发现Nogo-B-/-小鼠生存率显著下降，体重丧失后无法恢复到基数水平，肺组织损伤较WT组程度加重，肺泡灌洗液蛋白定量检测示蛋白渗出增多。同时野生型小鼠肺湿/干重比例低于Nogo-B基因敲除小鼠。根据以上这些实验结果，我们再次证实了敲除Nogo-B基因可加重对ALI小鼠肺组织炎症及损伤程度，进一步反证了Nogo-B对ALI小鼠确有保护性作用。最后探讨了Nogo-B通过TLR4通路发挥对巨噬细胞的功能作用。揭示了Nogo-B调控肺泡巨噬细胞募集参与ALI/ARDS发生、发展过程的机制作用，并为ALI/ARDS的预防及救治提供了新的思路。