PI3K-Akt信号通路介导ApoM抗移植物血管病变的作用研究

This research aims to evaluate apolipoprotein M (ApoM) on preventing graft vascular disease. Using BALB/C mice as donors and C57 mice as receptors, we will construct abdominal aorta transplantation models, indicating ApoM gene knocked out mice as negative experimental group and lentiviral transfected mice with ApoM gene as positive experimental group. We would gather graft aortas and blood specimens one week and four weeks after abdominal aorta transplantation. Evaluate graft vascular disease through metering vascular intima thickness under by HE staining, demonstrate expression of immune associated proteins in endangium by immunohistochemical method, calculate inflammatory factors concentration in advantage of Luminex technology, show lymphocyte division by flow cytometry, thus we investigate the differences of inflammation among these groups and screen out effector proteins. In the end, evaluate activation of PI3K-Akt signal pathway and discuss that whether ApoM prevent graft vascular disease mediated by PI3K-Akt pathway.

本文旨在探讨载脂蛋白M在移植物血管病变中的保护作用。以BALB/C小鼠为供体，C57小鼠为受体，建立小鼠血管腹主动脉移植模型，并设ApoM基因敲除小鼠为负义试验组，慢病毒转染ApoM基因小鼠为正义试验组。分别于移植后一周和四周收集移植血管和血液标本。HE染色测量移植血管内膜厚度评估移植物血管病变，免疫组化检测血管内膜免疫相关蛋白的表达，Luminex技术检测血液中炎症因子浓度，流式细胞仪检测淋巴细胞不同亚群分布差异，从而探讨不同组间炎症反应的差异性并筛选相关效应蛋白。探讨PI3K-Akt信号通路在不同组内激活情况，并探讨载脂蛋白M是否通过该通路实现移植物血管病变的保护功能。

心脏移植后移植排异机制仍不明确，脂质代谢和载脂蛋白在其中的作用近年来受到关注，高密度脂蛋白（HDL）是移植血管病变发生发展的重要因素，而ApoM正是HDL发挥转运胆固醇的协同脂蛋白。近期有多篇研究指出，ApoM或者SIP通过激活PI3K-Akt信号通路来调节内皮细胞功能。因此本课题拟从PI3K-Akt信号通路探讨ApoM对移植心脏保护作用的可能。首先建立稳定的大鼠腹腔心脏异位移植模型，并创新采用U型切口可缩短手术热缺血时间；通过心包腔内原位注射ApoM+腺相关病毒和ApoM-腺相关病毒建立供体的实验组和对照组，3天时心超提示所有供心存活和且实验组心率慢于对照组心率，7天时取其受体外周血和脾脏进行流式细胞仪检测发现实验组中NK细胞表达水平明显低于对照组；使用ELISA技术检测受体血液中炎症相关因子浓度发现两组均无显著差异，免疫组化检测发现实验组供心中TGF-β1低表达而E-cadherin高表达，此外RT-PCR、Western Blot结果提示实验组供心TNF-α、IFN-γ、MCP-1和MIP-1表达水平显著降低。本课题如期完成，取得了重大进展及实验成果，现发表文章4篇。这不仅论证ApoM对移植心脏保护作用的可能，也为临床上移植免疫治疗提供新的视角和靶向。