基于内质网稳态的针刺及其效应物质保护惊厥性脑损伤机制研究

内质网应激反应在细胞凋亡过程中具有关键作用。本项目拟采用激光共聚焦显微镜、TUNEL技术、Western-Blot和免疫组化方法，针对内质网应激反应所致的内质网钙离子及内质网应激反应标志蛋白caspase-12、Grp78、CHOP的变化进行研究，分析各指标变化与神经元凋亡关系。建立无镁诱发海马神经元惊厥放电模型和戊四唑诱发大鼠惊厥发作模型，从体内、体外两方面研究针刺治疗及针刺效应物质（针刺血清）对惊厥发作内质网应激反应过程中内质网钙离子、caspases-12、Grp78、CHOP蛋白表达等各指标影响，及其与海马神经元凋亡关系。分析针刺及针刺效应物质、内质网应激、神经元凋亡三者的相关性。通过本项目研究，可望在理论上揭示维持内质网稳态是针刺防治惊厥性脑损伤的有效途径，为针灸防治脑损伤的基础和临床研究提供思路。

该课题通过动物实验、细胞培养两部分观察针刺及其效应物质对惊厥大鼠海马神经元内质网内钙离子、caspases-12、Grp78、CHOP蛋白表达的影响，探讨针刺对惊厥性脑损伤保护机制与神经元内质网应激反应的关系。.动物实验：分正常组、模型组、针刺组，各组大鼠于惊厥后2h、12h、48h三个时间段，进行海马神经元凋亡、内质网钙离子、caspases-12、Grp78、CHOP蛋白表达等检测。细胞培养：分正常组、无镁组、针刺血清组、非针刺血清组，各组分别于神经元无镁培养放电后2h、12h、48h取材进行上述各指标检测。.结果：动物实验发现，模型组在惊厥发作后2h海马神经元即有凋亡发生，12h达到高峰，针刺组凋亡神经元明显减少；惊厥发作后2h海马神经元内质网钙离子明显减少，其中12h-48h减少最为明显，针刺组12h-48h内质网钙离子明显增加；caspases-12蛋白表达在惊厥发作后三个时间段皆明显增加，针刺组三个时间段皆明显减少；惊厥发作后2h Grp78蛋白表达短暂增加，随后迅速减少，针刺组三个时间段皆明显增加；惊厥发作后三个时间段CHOP蛋白表达皆明显增加，针刺组三个时间段皆明显减少，其中12h减少最为明显。细胞培养发现，无镁组在神经元放电后2h神经元明显凋亡，48h达高峰，针刺血清组神经元凋亡明显减少，12h-48h减少最为明显，非针刺血清组神经元凋亡改善不明显；无镁组12h-48h时间段神经元内质网钙离子明显减少，针刺血清组在12h-48h时间段内质网钙离子明显增加，非针刺血清组内质网钙离子无明显增加；无镁组三个时间段caspases-12蛋白表达皆明显增加，其中2h-12h增加明显，针刺血清组则明显减少，其中12h-48h减少最为明显，非针刺血清组改善不明显；无镁组在2h时间段Grp78蛋白表达短暂增加，其后迅速减少，针刺血清组三个时间段皆明显增加，其中12h增加最为明显，非针刺血清组改善不明显；无镁组三个时间段CHOP蛋白表达皆明显增加，针刺血清组则明显减少，其中12h-48h减少最为明显，非针刺血清组改善不明显。.结论：惊厥发作后迅速启动内质网应激机制，表现为内质网钙离子迅速耗竭、caspases-12蛋白表达增加、Grp78蛋白表达短暂增加后迅速减少、CHOP蛋白表达增加；而针刺及针刺血清皆有明显的稳定内质网内环境，干预内质网应激反应凋亡途径的启