长链非编码LincROR 吸附miRNA在调控牙髓干细胞自我更新中的作用机制

Better understanding of the mechanism responsible for regulating dental pulp stem cell self-renewal is urgently needed. In our preliminary studies, qPCR analysis and shRNA knock-down assays showed that inhibition of Linc-ROR inhibited self-renewal of dental pulp stem cells, downregulated the expressions of the key transcription factor（Oct4,Sox2 and Nanog）involved, and upregulated miRNA (miR-20b,miR-335 and miR-17) that negatively regulate stemness. Moreover, mimics of these miRNAs inhibited the expressions of the Oct4 mRNA. We therefore hypothesize that Linc-ROR is a ceRNA that protects Oct4 mRNA from miRNAs-mediated degradation in dental pulp stem cells. We aim to explore the role of Linc-ROR in regulation of self-renewal of dental pulp stem cells by overexpession and shRNA knockdown using lentiviral transduction, and to define the regulation mechanism of the Linc-ROR-miRNA-Oct4 pathway in self-renewal of dental pulp stem cells with RNA immunoprecipitation assays. The results will provide instructive information for development of dental pulp stem cells as tools in the clinical management of dental diseases.

寻找自我更新调控靶点有助于解决牙髓干细胞应用中的瓶颈问题。我们借助qPCR芯片筛选和功能试验发现牙髓干细胞内长链非编码Linc-ROR可能充当ceRNA吸附miRNAs，以解除miRNAs对干性转录因子的抑制作用, 从而调控细胞自我更新能力，结果显示抑制Linc-ROR表达细胞自我更新能力和干性转录因子表达降低，同时与干性负相关的miRNAs (miR-20b,miR-335和miR-17)表达增高，相应miRNAs mimics抑制干性转录因子表达。本课题拟在此基础上借助过表达和shRNA慢病毒载体明确Linc-ROR 在牙髓干细胞自我更新中的作用，结合RNA免疫共沉淀等验证其在牙髓干细胞自我更新中的ceRNA调控机制，并评价以其为靶点体外维持细胞自我更新能力的可行性。研究结果将为牙髓干细胞组织工程应用提供新的思路，具有重要实践意义。

组织工程修复缺损和器官是再生医学研究的热点，牙髓干细胞易取材，是极具潜力的组织工程种子细胞，但相对有限的自我更新能力阻碍其临床应用。搞清牙髓干细胞自我更新调控机制，寻找调控网络中关键分子有助于解决其应用中的瓶颈问题。长链非编码RNA是干细胞干性维持和分化的重要调控分子，并具有ceRNAs功能，但有关其在牙髓干细胞的功能尚不清楚。. 前期我们借助qPCR芯片筛选和功能试验发现牙髓干细胞内长链非编码Linc-ROR可能充当ceRNA吸附miRNAs，以解除miRNAs对干性转录因子的抑制作用, 从而调控细胞自我更新能力，结果显示抑制Linc-ROR表达细胞自我更新能力和干性转录因子表达降低，应用RNA免疫共沉淀技术检测 miRNA与OCT4以及Linc-ROR结合能力，确定LincROR调控的靶miRNA，最后在以上研究结果基础上明确Linc-ROR通过吸附miR145控制Oct4表达参与调控牙髓干细胞自我更新的机制。研究旨在揭示Linc-ROR参与牙髓干细胞自我更新的调控机制，并讨论利用其改善细胞更新能力的可行性。结果将对阐明牙髓干细胞“干性”维持的分子机制具有重要意义，有助于解决牙髓干细胞组织工程瓶颈问题，为牙髓干细胞应用于组织工程提供新的思路。