培土生金法调控TNKS2/Axin1/wnt 信号轴抑制脾气虚型非小细胞肺癌转移的机制研究

Lung cancer is one of the world’s fastest growing malignancies both in the incidence and death rate, and the main cause for its poor prognosis is metastasis. Patients of lung cancer metastasis are usually presented with spleen qi deficiency syndrome. In our previous studies, we found that the expressing of TNKS gene was highly related to the grade malignancy in lung cancer with spleen qi deficiency. It is known that TNKS can regulate Wnt signaling pathway by affecting tumor suppressor gene Axin, and Wnt is the classic pathway for determining cancer metastasis. Thus, we believe that TNKS/Axin/Wnt signaling axis could be the key in the process of lung cancer metastasis with spleen qi deficiency. .Traditional Chinese Medical method "reinforcing the earth to generate the metal" is based on the mother-child relationship between the spleen and lung according to the theory of five elements, which indicates that focusing on regulating the spleen can treat diseases located in the lung. Huáng Tŭ Tāng (Yellow Earth Decoction), as one of the representative formulas for spleen qi deficiency, has been recently used in treating cancers, especially in the field of lung cancer with spleen qi deficiency. Therefore, in order to make clear the potential mechanism, we try to aim at the signaling axis of TNKS/Axin/Wnt to explore the possible action targets of Huáng Tŭ Tāng in inhibiting metastasis in non-small cell lung cancer with spleen qi deficiency.

肺癌是世界上发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一，肺癌预后不良的主要原因是转移。临床肺癌转移患者常见脾气虚证，前期研究表明其与端锚聚合酶（TNKS）的调控有关。已知TNKS能通过影响抑癌基因Axin调控Wnt信号通路，后者是决定癌症转移的经典通路。由此我们认为，TNKS/Axin/Wnt信号通路是脾气虚型肺癌转移过程中的关键机制轴。.古法“培土生金”依据脾土与肺金为母子关系，常用于肺病的临床治疗与研究。黄土汤方是治疗脾虚证的经典方剂，近年来被应用于肿瘤治疗领域，尤其是在脾气虚型肺癌患者治疗中。本项目旨在明确“培土生金”法通过TNKS/Axin/Wnt传导信号轴调节脾气虚型非小细胞肺癌转移的分子机制，探索黄土汤方在调控过程中的直接作用靶点及对其复合物形成过程中的影响，为中医防治肺癌提供现代科学依据。

肺癌是世界上发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一，其预后不良的主要原因是转移。临床肺癌转移患者常见脾气虚证，近年来，临床借助“培土生金”理论将黄土汤方应用于脾气虚证肺癌患者的治疗，疗效满意。且前期研究表明癌症的转移与端锚聚合酶（TNKS）的调控有关，已知TNKS能通过影响抑癌基因Axin调控Wnt信号通路，且后者是决定癌症转移的经典通路。由此，我们围绕TNKS2和Wnt信号通路相关蛋白APC、Axin等，研究脾气虚证肺癌转移过程的关键机制轴以及黄土汤的干预机制。.本项目第一部分通过体外试验，研究黄土汤通过调控TNKS2/APC蛋白表达干预非小细胞肺癌转移的机制。结果显示TNKS2基因高表达细胞系迁移能力较强；黄土汤含药血清能抑制A549、H647细胞迁移能力，也能抑制经TNKS2基因作用后的A549、H647细胞迁移能力；黄土汤含药血清能抑制TNKS2基因过表达的A549细胞中TNKS2表达，调高经TNKS2 基因干扰的H647细胞中APC表达。第二部分进行动物实验，用大黄苦寒泻下法结合饮食不节法复制脾气虚证小鼠模型，并应用黄土汤对模型动物进行复健。结果表明，模型经黄土汤复健后，宏观症状和微观指标均得到改善。第三部分进行体内实验，构建TNKS2基因表达差异的脾气虚证肺癌小鼠模型，研究黄土汤对不同恶性程度肺癌小鼠的干预机制，并试图明确其作用机制是否与调节TNKS2表达有关。因实验中，癌细胞未能在小鼠体内形成肿瘤病灶，实验失败。但实验记录和检测结果表明，黄土汤对肺癌接种小鼠的脾气虚相关指标均有复健作用；而肿瘤恶性程度相关基因TNKS2的表达与上述指标的变化成逆相关，即TNKS2表达高的脾气虚相关指标较差,而TNKS2表达低的较好。.本研究明确了黄土汤对恶性程度不同的NSCLC细胞转移均有抑制作用，可通过下调TNKS2表达或诱导抑癌蛋白APC表达，从而影响NSCLC的发生、发展、转移；黄土汤对脾气虚证有显著的治疗作用，对肺癌接种小鼠的脾气虚相关指标均有复健作用，且TNKS2的表达与上述指标的变化成逆相关。这对后续进一步研究Wnt通路其它相关蛋白对NSCLC的干预作用，完善体内实验方案，探讨黄土汤干预脾气虚肺癌小鼠作用的机制奠定了基础。