β-肾上腺素受体在吸烟诱发食管鳞癌中的作用

我们研究发现，烟草提取物可以激活β肾上腺素受体，促进食管鳞状上皮细胞增殖，而β肾上腺素受体抑制剂则可以抑制烟草提取物的促增殖作用。因此我们提出β肾上腺素受体可能是吸烟诱发食管鳞癌的途径，而N－亚硝基去甲基烟碱（NNN）可能是其中的关键物质之一的假说。分别通过特异性的受体抑制剂预处理β肾上腺素受体阳性表达食管鳞癌细胞、将β肾上腺素受体基因转染至无β肾上腺素受体表达的食管鳞癌细胞，然后再加入NNN于培养体系，探索食管鳞癌细胞生物学特性（增殖、凋亡、侵袭、迁移）以及ERK1/2磷酸化、Cyclin D1、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达的变化；在食管鳞癌动物模型中证实NNN和β肾上腺素受体抑制剂对肿瘤体积、血管密度和VEGF表达的影响。研究结果为β肾上腺素受体可能是吸烟诱发食管鳞癌的假说提供依据，为进一步探索吸烟诱发食管鳞癌的机制提供新思路，将对烟草诱发食管癌的化学预防提供新靶点。

目的：本研究的目的是明确NNK是否通过beta肾上腺素能受体作用于食管细胞和食管癌裸鼠模型。.方法：用RNA干扰技术特异性阻断食管鳞癌细胞系KYSE410和食管永生化细胞系HET-1A的beta1和beta2肾上腺素能受体表达。根据实验需要分为空白组、阴性对照组、干扰组、空白+NNK组、阴性对照+NNK组、干扰+NNK组。用Transwell小室技术检测NNK对细胞侵袭、迁移的影响，MTT方法来检测细胞增殖，AV-PI双染技术测定细胞凋亡。通过Western来测量p-Erk1/2, VEGF, Cyclin-D1, Bcl-2 和 Bax的蛋白表达量。食管鳞癌细胞系KYSE410接种于裸鼠，通过免疫组化检测CD31和VEGF的表达。.结果：NNK可促进食管鳞癌细胞系KYSE410和永生化细胞系HET-1A的增殖，抑制其凋亡。在食管鳞癌细胞系KYSE410NNK促进细胞侵袭和迁移。蛋白印迹结果显示NNK促进p-Erk1/2, VEGF, Cyclin-D1和Bcl-2蛋白的表达，对BAX表达无明显影响。在裸鼠模型中，NNK促进肿瘤生长及CD31和VEGF表达。然而，当beta肾上腺素能受体RNA被干扰后，NNK的上述作用可被逆转。.结论：NNK可通过beta肾上腺素能受体途径促进食管细胞增殖、侵袭、迁移，抑制细胞凋亡，在食管癌裸鼠模型中，促进肿瘤生长。