食管鳞癌发病中EGFR/β2-肾上腺素受体/COX-2新路径

表皮生长因子受体（EGFR）的高表达与人类食管鳞癌密切相关，但其作用机制尚未阐明。我们近期首次报道了EGFR活化能通过增加肾上腺素合成和分泌促进食管鳞癌细胞增殖，其促癌作用可被肾上腺素受体阻滞剂抑制；还发现β2-肾上腺素受体活化可经环氧化酶-2（COX-2）促进食管鳞癌细胞增殖。然而EGFR是否经COX-2促进食管鳞癌细胞增殖尚不清楚。本项目一方面拟在原代食管鳞癌细胞及裸鼠模型中探求EGFR活化是否经β2-肾上腺素受体/COX-2路径促进食管鳞癌生长，同时在人体食管鳞癌标本中进一步寻求EGFR活化的促癌作用与COX-2具有相关性的证据；另一方面在细胞及动物模型水平初步探讨COX-2选择性抑制剂可否阻断EGFR活化对食管鳞癌的促生长作用。本研究目的在于初步阐明食管鳞癌发病中是否存在EGFR/β2-肾上腺素受体/COX-2这一新路径，为明确食管鳞癌的发病机制并探求其防治方法提供实验室依据。

研究背景.食管鳞癌的病因及发病机制，尤其是EGFR在食管鳞癌发病机制中所起的作用尚未得到完全阐明。我们既往研究发现食管鳞癌中EGFR活化的促癌作用有可能经β2-肾上腺素受体途径实现。本研究旨在食管鳞癌细胞及裸鼠模型中探求EGFR活化是否经β2-肾上腺素受体促进食管鳞癌生长和COX-2表达，同时在人体食管鳞癌标本中进一步寻求EGFR与COX-2表达具有相关性的证据。.材料和方法： .检验 EGF联合或者不联合EGFR 酪氨酸激酶抑制剂AG1478、β2-肾上腺素受体阻断剂ICI11551、COX-2选择性抑制剂尼美舒利对食管鳞癌细胞株KYSE30增殖的影响，测定COX-2 mRNA 和蛋白的表达水平。建立食管鳞癌KYSE30裸鼠移植瘤模型，将其随机分为对照组、EGF组、EGF联合AG1478组、EGF联合ICI 118551组和EGF联合尼美舒利组，观察各组裸鼠移植瘤的生长情况，测定COX-2 mRNA 和蛋白的表达水平。蛋白印迹法检验食管鳞癌组织及配对的癌旁组织标本，根据EGFR蛋白的表达水平高低将组织标本分为两组，然后检测组织COX-2的表达情况。免疫组织化学法检验食管鳞癌组织标本中EGFR和COX-2的表达，评价EGFR和COX-2表达的相关性。.结果：.（1）EGF呈浓度依赖性促进KYSE30细胞的增殖，这种增殖效应可被AG1478、ICI 118551和尼美舒利所阻断。EGF促进食管鳞癌细胞COX-2 mRNA和蛋白表达，而 AG1478和ICI 118551可阻断EGF的促COX-2表达作用。.（2）KYSE30裸鼠移植瘤模型中，EGF可明显促进食管鳞癌移植瘤生长，而AG1478、ICI 118551和尼美舒利均可阻断EGF的促肿瘤生长作用。AG1478和ICI 118551可阻断EGF促进移植瘤COX-2表达的作用。.（3）Western印迹法证实，食管鳞癌组织标本中EGFR高表达组的COX-2蛋白表达高于EGFR低表达组。免疫组化结果显示食管鳞癌组织标本中EGFR和COX-2表达呈正相关。.结论：.EGFR活化后通过激活β2-肾上腺素受体途径促进食管鳞癌COX-2表达和肿瘤生长，β2-肾上腺素受体激活是连结食管鳞癌中EGFR活化和COX-2表达的重要中间环节，为β2-肾上腺素受体阻断剂和COX-2抑制剂用于人食管鳞癌防治提供新的依据。