四种鹅绒藤属植物中抗癫痫活性成分的发现及其作用机制研究

癫痫是一种常见的神经系统疾病，抗癫痫药物（anti-epileptic drugs，AEDs）是目前治疗癫痫的首选方法，从天然植物中寻找药效更强、毒性更低的抗癫痫活性成分是未来AEDs研究的一个方向。.本课题以抗癫痫活性为导向，对青阳参、西藏牛皮消、豹药藤和鹅绒藤等四种鹅绒藤属植物的化学成分进行系统分离和纯化。利用抗PTZ诱导的斑马鱼癫痫模型，对分离的化合物进行定性和定量的药效活性评价，以发现具有明显作用的抗癫痫活性成分。通过进一步探明斑马鱼经不同药物处理后c-fos、c-jun mRNA和蛋白表达变化，初步揭示其作用机理。.该研究将为临床开发新的AEDs提供前期基础，并有可能促进对四种潜在药用植物资源的深度开发和利用。

癫痫是一种严重且复杂的以神经系统功能异常为主要特征的疾病，目前全世界有大约6500万人口患有癫痫。青阳参作为我国传统民族中药，现已被证实具有抗癫痫的功效，同属植物西藏牛皮消和鹅绒藤的提取物也被报导具有相似的活性。本项目主要围绕上述三种鹅绒藤属植物的抗癫痫活性开展研究，以期发现一些新的天然抗癫痫活性物质。.我们以抗癫痫活性为导向，对三种植物的化学成分进行了系统分离和纯化。从青阳参中分离得到C21甾体类化合物38个，其中新化合物19个；从西藏牛皮消中分离鉴定28个化合物，11个为新化合物；从鹅绒藤中分离得到15个化合物，其中3个化合物为首次从该属植物中得到。.我们利用PTZ 诱导的斑马鱼癫痫模型，对三种植物的有效部位和单体化合物进行了抗癫痫活性评价。结果显示，青阳参地下部分的氯仿提取物可显著低PTZ诱导的斑马鱼癫痫样游泳行为，在100 ng/mL已有明显药效，且有良好的浓度依赖关系。西藏牛皮消地下部分的乙酸乙酯提取物（600 µg/ml）和鹅绒藤地下部分的正丁醇提取物（300 µg/ml）也表现出较好的活性。此外，LX5、LX8、LX10、LX14、LX17和LX24等单体化合物在抗PTZ点燃作用的游泳行为分析中也表现出不同程度的抑制作用。.同时，基于血清药物化学方法，本课题进一步对几种植物中活性最好的青阳参进行了抗癫痫活性的深入研究。利用人工胃肠液和大鼠体内胃肠道模型，发现两个主要入血成分：M1和M2。利用MES诱导惊厥ICR小鼠模型和斑马鱼模型，证明M1和M2与苯巴比妥联合用药有协同增效作用。通过斑马鱼实验进一步发现，M2单独给药能够显著降低造模组惊厥性游泳行为的发生，而M1单独给药无明显活性。.此外，我们利用real-time PCR技术和钙离子荧光检测技术，发现青阳参和西藏牛皮消的活性部位能明显下调PTZ诱导的斑马鱼c-fos基因的表达，显著降低4-AP引起的小鼠皮层神经元细胞内钙离子流震荡的振幅。通过对原代小鼠大脑皮层神经元的形态学观察、细胞存活率检测、细胞LDH释放量检测和蛋白表达检测，发现M2可减小PTZ诱导的神经元损伤，抑制PTZ引起的PARP切割及Bax/Bcl2和c-Fos上调；在斑马鱼模型中也证实M2能够显著降低PTZ诱导的c-fos基因升高、Bcl-2的下降以及Bax与Bcl-2比值的升高，初步揭示了这些成分抗癫痫和神经保护的作用