人胚胎内皮前体细胞（EPCs）治疗血管损伤的作用和机制研究

Vascular remodeling are main pathological process of cardiovascular disease, repair endothelial damage can reversal vascular remodeling. The application of endothelial precursor cells (EPCs) to repair and improve vascular injury is hot . Recent study indicated that EPCs have self-renew ability and hold the potential to differentiate into endothelial cells which can repair endothelial cell injury in injury vascular through angiogenesis and establish collateral circulation.Therefore,the transplantation of EPCs will be the most promising therapy for vascular injury. In this study, the EPCs will be isolated from human fetal aorta and establish the methods to induce EPCs proliferation and differentiation toward endothelial cells in vitro. The biological characteristics of human EPCs will be investigated including surface markers,immunogenesity,regulating mechanisms of of differentiation, repairing endothelial. Also we investigated the effect and mechanism of exosomes in the procedure. These study will provide theory and experimental evidences for EPCs application for prevention and treatment of vascular injury.

血管重塑是心血管疾病发生的关键病理过程，修复血管内皮损伤对逆转血管重塑具有重要意义。应用血管内皮前体细胞(EPCs)修复和改善血管损伤是目前研究的热点。我们从小于14 周龄的人胚胎主动脉血管壁分离、纯化、扩增了EPCs，发现人胚胎来源的EPCs:(1)具有自我更新和分化成为血管内皮细胞的潜能；(3)免疫原性低，移植后不发生排斥反应；(3)能够修复损伤的内皮细胞，阻断血管损伤后内膜增生。但是EPCs修复和改善损伤后血管内膜增生的作用尚不清楚。根据预实验结果，我们提出外泌体可能是EPCs修复和改善血管损伤的发挥重要作用的新假说。本课题拟利用EPCs和EPCs的外泌体，采用实时PCR、免疫印迹、免疫组化等技术在细胞分子水平研究EPCs和EPCs的外泌体对VSMCs增殖活性和迁移能力的影响，并在大鼠颈动脉球囊拉伤模型中进行验证，进而为EPCs临床治疗血管损伤提供理论基础。

血管重塑是心血管疾病发生的关键病理过程，修复血管内皮损伤对逆转血管重塑具有重要意义，应用血管内皮前体细胞(EPCs)修复和改善血管损伤是目前研究的热点。我们从小于14周龄的人胚胎主动脉血管壁分离、纯化、扩增了EPCs。人胚胎来源的EPCs(1)具有自我更新和分化成为血管内皮细胞的潜能；(2)免疫原性低，移植后不发生排斥反应；(3)能够修复损伤的内皮细胞，阻断血管损伤后内膜增生。.细胞的增殖和迁移都参与了血管成形术和支架植入术后再狭窄的病理过程。关于外泌体在EC损伤和SMC增殖中的治疗作用的研究很少。我们研究人胎主动脉衍生EPCs释放的外泌体对大鼠颈动脉球囊损伤模型的影响，确定外泌体在体外对ECs和SMCs的影响。我们从人胚胎主动脉中分离纯化和扩增EPCs，完成EPCs功能鉴定；研究EPCs的定向诱导分化研究；在细胞水平研究EPCs增殖、分化能力，完成EPCs外泌体的分离纯化及鉴定工作。建立球囊拉伤颈动脉损伤动物模型，分析研究EPCs 外泌体应用对血管损伤的修复功能，评价EPCs外泌体对血管损伤后血管重塑的治疗效果。在体外研究中，外泌体治疗显著增强了ECs和SMCs的增殖和迁移。动物水平的研究发现：内皮祖细胞来源的外泌体可抑制大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生。外泌体的保护作用可能是通过促进EC修复而不是直接抑制平滑肌细胞的增殖和迁移来体现的。EPCs外泌体在应用人胚胎血管来源的EPCs在临床上治疗血管重塑具有坚实的理论基础，可望为EPCs的临床转化提供进一步理论基础和实验依据。