实验性自身免疫性重症肌无力中腺苷A2A受体参与Th亚群失衡调节的作用及相关机制的研究

Myasthenia gravis (MG) is a B cell-mediated, T cell-dependent autoimmune disease characterized by excessive muscle weakness and fatigue. People have demonstrated that Th subsets distributions play a critical role in MG development. Thus, founding a drug that can reverse this distribution is the key point of this disease. Adenosine A2A receptor (A2AR) is predominantly expressed on T cells and has different role to Treg cell and T-effector cell. The importance of A2AR in mediating adenosine mediated negative regulation has been clearly demonstrated in A2AR null mice. However, the regulatory role of A2AR in mediating MG/EAMG disease severity and progression has not been described. In this study, we investigated whether A2AR expression was functionally altered in rats presenting with EAMG and whether the administration of an A2AR agonist prevented EAMG induction or facilitated improvement of clinical symptoms associated with established disease. We concluded that our resutlts may represent a new class of compounds that can be developed for use in the treatment of MG or other T cell- and B cell-mediated autoimmune diseases.

重症肌无力（MG）是B细胞介导T细胞依赖的自身免疫性疾病，该病中Th细胞亚群之间的平衡变化决定该病的结局，在MG发病机制中有着极为重要的作用，因此寻找到能纠正Th细胞亚群失衡的靶点是治疗这种疾病的关键。最新研究发现，T细胞表面表达的腺苷A2A受体（A2AR）主要承担下调炎症、参与免疫反应和神经保护作用，并且A2AR对T细胞有调节作用。但A2AR在MG/EAMG疾病中的作用及对AChR特异性Th细胞亚群的影响，仍不清楚。前期工作中我们已经得到EAMG动物模型中A2AR表达下降，激活A2AR受体后对EAMG起到保护作用的结果。本课题首次系统研究A2AR在EAMG中的作用及对整个Th细胞亚群的影响，并深入探讨A2AR影响Th亚群的具有调节机制。本项目的完成为临床寻找到治疗MG的靶点提供理论和实验依据。

经过我们近三年对腺苷受体在实验性自身免疫性重症肌无力（Experimental Autoimmune Myasthenia Gravisa，EAMG）动物模型中的研究，我们如期完成了课题内容。腺苷主要是通过四种腺苷受体对机体发挥作用，腺苷A1受体（Adenosine A1 Receptor， A1R），腺苷A2A受体（Adenosine A2A Receptor， A2AR），腺苷A2B受体（Adenosine A2B Receptor， A2BR）和腺苷A3受体（Adenosine A3 Receptor， A3R）。所以我们最开始通过FACs，RT-qPCR和WB检测了四种腺苷受体在EAMG动物模型的脾脏，淋巴结和外周血中的表达。结果显示， A1R和A2AR的mRNA和蛋白在脾脏，淋巴结和外周血中的表达均下降； A2BR和A3R的mRNA和蛋白在脾脏，淋巴结和外周血中的表达没有变化。EAMG是T细胞依赖B细胞介导的动物模型，于是我们检测了T细胞和B细胞上面A2AR的表达，发现在T、B细胞上面，A2AR表达均下降。于是我们提出假设：当A2AR受体的表达下降时，如果能够给予A2AR激活剂，增强单个细胞上A2AR的活性，是否能够代偿下降的A2AR受体数量，维持A2AR的免疫负向调节功能，在一定程度上对EAMG进行缓解。于是我们通过体外实验，给予AChR特异性淋巴细胞A2AR激动剂，A2AR激活后， AChR特异性抗体的分泌减少， AChR特异性淋巴细胞增殖下降。并且A2AR激活后能够缓解EAMG疾病进程中Th亚群的失衡，即促炎性Th细胞（Th1和Th17）数量下调，抑炎性Th细胞（Th2和Treg）数量上升。体内实验给予A2AR激动剂，也能够缓解EAMG的临床症状，疾病评分，减少AChR特异性抗体的分泌，和降低AChR特异性淋巴细胞增殖。并且也能够调节EAMG疾病进程中Th亚群的失衡。所以推测A2AR激动剂有望成为一种新的缓解EAMG的免疫调节性药物。本课题共发表论文四篇，其中SCI三篇，同时培养博士研究生两名，顺利的完成了课题预期的计划。