柑橘溃疡病菌致病机理研究

柑橘溃疡病（citrus bacterial canker disease）是由地毯黄单孢杆菌柑橘致病变种（Xanthomonas axonopodis pv. citri）引起的一种世界性的检疫性病害，危害绝大多数柑橘主产区，严重影响柑橘产业的健康发展，该病目前还无有效方法防治，生产中也没有完全抗病的品种。溃疡病菌的致病机理仅有少数假说没有全面探明致病过程和机理的研究，使对溃疡病的防治、抗病分子育种存在盲目性，几十年的研究未能取得实质性进展。本项目拟对病原菌侵染进行实时全过程监控开始，探明侵染途径和病菌入侵后栖宿部位；同时，探讨致病因子PthA的表达与致病性的关系；通过免疫共沉淀结合质谱分析，找出PthA的结合因子，利用激光共聚焦显微镜结合免疫荧光定位示踪PthA在寄主细胞中的位置，为有效的防治柑橘溃疡病和抗病分子育种奠定基础。

柑橘溃疡病（citrus bacterial canker disease）是由地毯黄单孢杆菌柑橘致病变种（Xanthomonas axonopodis pv. citri）引起的一种世界性的检疫性病害，危害绝大多数柑橘主产区，严重影响柑橘产业的健康发展。该病目前还无有效方法防治，生产中也没有完全抗病的品种。溃疡病菌的致病机理仅有少数假说，没有全面探明致病过程和机理的研究，使对溃疡病的防治、抗病分子育种存在盲目性，多年的研究未能取得实质性进展。本项目通过利用EGFP荧光溃疡病菌侵染冰糖橙叶片，在激光共聚焦显微镜下观察到溃疡病菌在冰糖橙叶片的叶肉组织增殖迅速，很快引发病害，由此探明溃疡病菌侵染途径和病菌入侵后栖宿部位。同时，应用SDS-PAGE电泳、Western blot和ELISA技术结合田间接种鉴定，探讨了溃疡病菌不同的生长阶段的PthA表达与致病性的关系，研究表明，培养36h的病原菌蛋白质表达谱最丰富，PthA表达量最高，致病性最强。利用PthA-nls单克隆抗体，通过免疫共沉淀的方法在感病寄主体内找到一个与PthA有互作关系的靶标蛋白，经过质谱鉴定后命名为CsSRP54。利用荧光融合蛋白示踪在激光共聚焦显微镜下观测到PthA的致病因子进入了植物细胞质和细胞核。研究结果为有效的防治柑橘溃疡病和提高抗溃疡病分子育种效率奠定基础。