基于Dll4/Notch信号通路探讨扶肾方抑制腹膜血管新生及miRNA调控机制的研究

Peritoneal angiogenesis is the main structural changes of peritoneum with long-term peritoneal dialysis (PD), which playing a key role in PD ultrafiltration failure, and it is an important reason for PD treatment failure. It is of great significance to reduce the incidence of ultrafiltration failure and prolong the time of PD treatment. Dll4/Notch signaling pathway and miRNA regulation mediate endothelial cell proliferation, specialization, and it is a key cause of peritoneal angiogenesis. Previous study found that invigorate the kidney particles with spleen and kidney, removing blood stasis Jiangzhuo effect can delay PD ultrafiltration failure. According to the hypothesis, inhibiting peritoneal angiogenesis and prevention of ultrafiltration failure by intervening Dll4/Notch signaling pathway, regulating miRNA with Fushen decoction. Obversing uremic rats PD model, endothelial cell culture model as the research object, using antagonists, Liquichip technology pathway of Dll4/Notch and miRNA. Observing the changes of proliferation, angiogenesis and endothelial cell specific before and after regulating. To clarify the mechanism and effect of ultrafiltration failure by preventing peritoneal neoangiogensis, through interventing Dll4/Notch signal pathway, regulating miRNA target effect group with Fushen decoction, and then to provide new ideas for improving clinical efficacy of PD.

腹膜血管新生是长期腹膜透析（PD）后腹膜发生的主要结构改变，在PD超滤衰竭的发生中起关键作用，是PD治疗失败的重要原因。抑制腹膜血管新生对降低超滤衰竭发生率延长PD治疗时间具有十分重要的意义。Dll4/Notch信号通路及部分miRNA调控是介导内皮细胞增殖、特化引起腹膜血管新生的关键。前期研究发现具有健脾益肾、化瘀降浊功效的扶肾方可延缓PD超滤衰竭。据此提出扶肾方干预Dll4/Notch信号通路、调控miRNA抑制腹膜血管新生防治超滤衰竭的假说，以大鼠尿毒症PD模型、内皮细胞培养模型为研究对象，采用拮抗剂、液相芯片等技术调节Dll4/Notch信号通路及miRNA，观察调节前后新生血管和内皮细胞增殖、特化的变化，阐明扶肾方干预Dll4/Notch信号通路、调控miRNA靶效群，揭示其抑制腹膜血管新生防治超滤衰竭的机制，为临床提高PD效能提供新思路。

腹膜血管新生是长期腹膜透析（PD）后腹膜发生的主要结构改变，在PD超滤衰竭的发生中起关键作用，是PD治疗失败的重要原因。抑制腹膜血管新生对降低超滤衰竭发生率延长PD治疗时间具有十分重要的意义。本研究采用在体实验、离体实验以及分子生物学等方法探究扶肾方通过Dll4/Notch信号通路抑制腹膜血管新生及miRNA的调控机制。在体实验通过观察扶肾方对尿毒症大鼠腹膜透析过程血管新生的影响以及对相关信号通路的调控作用，结果提示5/6肾切除加腹腔注射腹透液的两步法造模方法能成功建立尿毒症腹膜透析模型,扶肾方能够通过调控促血管生成因子和抑制血管生成因子VEGF、TNF-α、IL-12和IFN-γ的表达，维持血管稳态，防治血管新生的发生，且扶肾方干预后可上调相关基因和蛋白Notch1、Dll4、NICD、Hes1的表达，下调VEGFR-2、VEGF和p-VEGFR-2的表达，发挥抑制血管新生，防治腹膜超滤衰竭。离体细胞实验通过VEGF刺激人腹膜毛细血管内皮细胞构建腹膜血管新生模型，随后通过扶肾方进行干预，发现扶肾方能有效抑制体外动脉血管环发芽以及血管内皮细胞增值、迁移、管腔形成等血管新生特性，其具体机制可能是扶肾方调节Dll4/Notch1通路中的转录因子RBP-J，下调下游靶点Hes1、Hey1表达，从而下调VEGF以及VEGFR2，阻断腹膜毛细血管内皮细胞血管新生。随后通过转录组学发现miR-27b-3p是扶肾方与Dll4/Notch1通路的相交互靶点，采用慢病毒包被方法敲减过表达miR-27b-3p，通过PCR及WB方法发现与扶肾方组相比，抑制miR-27b-3p表达可以上调Dll4、Notch1、RBP-J以及下游靶点Hes1，影响腹膜血管新生相关指标VEGF以及VEGFR2的基因及蛋白表达水平,从而影响腹膜血管新生，阐述了扶肾方影响血管新生的表观遗传机制。综上，扶肾方通过多靶点调节Dll4/Notch信号通路抑制内皮细胞的增殖与特化，并调控相关miRNA交互作用靶点，抑制腹膜血管新生，防治超滤衰竭。