从miRNA调控VEGF-Notch信号通路探讨首乌益智胶囊治疗VCI的促血管新生机制

In view of the universality and necessity of early intervention to vascular cognitive impairment, the VCI model rats will be used as the study objects on the basis of previous studys. In this subject Shou Wu Yi Zhi Capsules will be used as the intervention means to further study angiogenesis mechanisms which associated with the VEGF-Notch/Delta signaling pathways and related microRNA.Before and after treatment the expressions of miRNA,VEGF,VEGFR2,Notch4 mRNA,Dll4 and related proteins will be detected by real-time PCR,Western blot,microarray and immunohistochemistry to discovery the changes of hypoxia-related miRNA .Mmunohistochemical staining will be used to detect CD31 which are expressed in the ischemic brain tissues to evaluate angiogenesis situation. The differential gene expression profiles of miRNA in VCI model rats will be established to further clarify the relationship between hypoxia-related miRNA and VEGF-Notch signaling pathway, angiogenesis. The study will further clarify the pathogenesis of VCI and clarify scientific mechanisms of Bushen Huoxue herbs to treat VCI ,which will lay the foundation for the objective diagnosis and treatment.

鉴于血管性认知障碍的普遍性和早期干预的必要性，本课题在以往前期研究的基础上，以血管性认知障碍（VCI）模型为研究对象，应用治疗VCI有效补肾活血中药"首乌益智胶囊"为干预手段，进一步深入研究缺氧诱导microRNA对VCI血管新生的VEGF-Notch/Delta信号通路的分子调控机制，采用实时PCR、Western blot、基因芯片法、免疫组织化学染色等技术，深入探讨治疗前后脑组织缺氧诱导miRNA、VEGF、VEGFR2、Notch4、Dll4 mRNA及相关蛋白表达的变化；免疫组化法检测缺血组织CD31表达判断血管新生的情况；建立与VCI血管新生有关的miRNA差异基因表达谱，明确缺氧相关miRNA的表达变化与VEGF-Notch信号途径、血管新生的关系。 此项研究将为进一步阐明VCI发病机理，阐明补肾活血中药对VCI治疗作用的科学机制及VCI肾虚血瘀证客观化诊治奠定基础。

鉴于血管性认知障碍的普遍性和早期干预的必要性，该课题以人静脉内皮细胞缺氧模型及血管性认知障碍模型大鼠为研究对象，应用治疗VCI有效补肾活血中药“首乌益智胶囊”为干预手段，通过体内外试验，采用实时PCR、免疫组织化学染色、电镜等技术检测治疗后miRNA-210, miRNA-126、VEGF, Dll4mRNA及相互关系，深入研究缺氧诱导microRNA对VCI血管新生的VEGF-Notch/Delta信号通路的分子调控机制，明确缺氧相关miRNA的表达变化与VEGF-Notch信号途径、血管新生的关系。. 体外试验结果：首乌益智胶囊能明显促进缺氧后人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移及管状结构生成，首乌益智组细胞VEGF、Dll4的mRNA及miR-126、miR-210表达均明显升高，与模型组和脑心通组比较，差异均具有统计学意义（P﹤0.05）。体内实验结果：首乌益智胶囊能明显促进血管性认知障碍模型大鼠脑微血管新生、明显提高VCI模型大鼠的学习和记忆能力，是治疗VCI的有效方剂，首乌益智组大鼠缺血侧脑皮质中VEGF、Dll4 的mRNA及miR-210、miR-126表达均明显升高，与模型组和脑心通组比较，差异均具有统计学意义（P﹤0.05或P﹤0.01）。研究结果表明：首乌益智胶囊可能是通过促进缺血/缺氧后miR-210、miR-126及VEGF、Dll4的基因表达，发挥其促血管新生的作用。. 此项研究将为进一步阐明VCI发病机理，阐明补肾活血中药对VCI治疗作用的科学机制及VCI肾虚血瘀证客观化诊治奠定基础。