基于Smurf2串话TGF-β/Smads通路探讨扶肾方防治腹膜间皮细胞EMT的研究

Peritoneal fibrosis is the main cause of decreasing peritoneal dialysis efficiency.Peritoneal dialysis effectively depends on the filtration membrane structure integrity, mesothelial cells is an important component of filtration membrane.Mesothelial cell phenotype transdifferentiation of peritoneal fibrosis (EMT) is the initiation and reversible process.TGF- β/Smads pathway is associated with the mesothelial cell EMT.To the electivity for smads protein, Smurf2 become a new target for regulation of TGF-β /Smads pathway, Previous studies have shown that: with " spleen and kidney, expelling turbid " effect of invigorate the kidney can delay the mesothelial cell EMT.Putting forward the hypothesis:based of Smurf2,Fushen decoction bidirectional regulate smads content, blocking the receptor complex formation;at the same time,maintaining a positive and negative receptor Smads protein physiological balance, inhibiting of TGF-β /Smads signaling pathway, mesothelial cells EMT and peritoneal fibrosis.In vivo and in vitro experiments,to invigorate the Fushen decoction mechanism of Smurf2 regulation of TGF-β/smads signal pathway and mesothelial cells of EMT.Subject to clarify Chinese medicine in prevention and treatment of peritoneal mesothelial cells and the mechainsm of EMT delay the peritoneal fibrosis, has an important significance to improve the long-term effect of peritoneal dialysis.

腹膜纤维化是降低腹膜透析效率的主要原因。腹膜透析有效进行取决于滤过膜结构完整，间皮细胞是组成滤过膜重要成分。间皮细胞表型转分化（EMT）是腹膜纤维化起始和可逆环节。TGF-β/Smads通路的激活与间皮细胞EMT密切相关。Smurf2通过选择性对 Smads蛋白调节，其已成为调节TGF-β/Smads通路的新靶点。前期研究表明：具有"健脾益肾，化瘀降浊"功效的扶肾方能够延缓间皮细胞EMT。提出假说：扶肾方基于Smurf2双向调节Smads含量，阻止受体复合物形成；同时维持正性和负性受体Smads蛋白生理平衡，阻断TGF-β/Smads信号通路，防治间皮细胞EMT，阻抑腹膜纤维化。在体和离体实验相结合，探讨扶肾方基于Smurf2调控TGF-β/Smads信号通路防治间皮细胞EMT的机制。课题对于阐明中医药防治腹膜间皮细胞EMT机理，延缓腹膜纤维化，提高腹透长期疗效具有重要意义。

腹膜间皮细胞表型转分化（EMT）是腹膜纤维化起始和可逆环节。TGF-β/Smads通路的激活与间皮细胞EMT密切相关。本实验分为在体实验和离体细胞实验：在体实验实行大鼠5/6肾脏切除法制作尿毒症模型，具有“健脾益肾，化瘀降浊”功效扶肾方干预后，降低了大鼠血清肌酐和尿素氮水平；上调腹膜间皮细胞特有的E-cadherin，ZO-1的基因表达，下调Vimentin，a-SMA基因表达；减轻腹膜上皮细胞转分化的形态学改变。其具体机制是：扶肾方上调TGFβ/Smad通路中TGFβRI和下调TGFβRII表达，下调正向调节Smad2,3基因和蛋白表达，并上调负向调节Smad7蛋白表达，上调Smurf2基因的表达，从而抑制复合物的形成，阻断腹膜间皮细胞上皮转分化的TGFβ/Smad通路。本实验扶肾方设定的三个剂量，结果未显示明显剂量依赖性，且不同剂量的扶肾方对TGFβ/Smad通路调节靶点不同。在离体细胞实验部分结果显示，扶肾方最佳含药血清，在基因水平上可以下调Smad3，上调Smad7含量，但在蛋白水平对Smad2.3.7影响不大，可能跟其活化的形式是磷酸化水平有关，下调SARA蛋白表达，影响Smad2，Smad3复合物形成，抑制TGFβ/Smad通路激活，抑制腹膜间皮细胞转分化。在体动物实验和离体细胞实验的相关指标结果中，并未出现完全一致性，尤其是Smurf2基因表达和蛋白水平不一致性，推测主要可能跟在体复杂的环境以及该指标的活化形式有关。.此外在完成实验设计的内容时，发现本实验中，增加了贝那普利药物干预组，结果显示：贝那普利药物可以调节TGF-β/Smads通路相关靶点，抑制腹膜纤维化，这与其在临床上有防止腹膜纤维化的临床疗效是一致的。在体动物实验中，发现模型组肠道形态发生明显改变，出现明显的炎细胞浸润，上皮脱落坏死比较明显，而扶肾方不同剂量组均有明显减轻，针对这一现象，后期将针对肠道菌群做一些深入研究。也提示扶肾方在防治腹膜转分化过程中，可能是多靶点多途径调节。