ID1-E2-2相互作用促进EPCs增殖及在损伤血管修复中的作用研究

EPCs play a key role in vascular re-generation and repair, and enhanced EPCs proliferation capacity could be of great significance to improve the treatment of EPCs transplantation in vascular injury disease. Our previous studies found that the transcription factor ID1 could promote EPCs proliferation, and revealed the ID1-E2-2 interaction by yeast two-hybrid system. We speculate: ID1 can inhibit the transpcriptional activity of E2-2 by binding to E2-2 topromote EPCs proliferation. Based on these hypothesis, we intend to identify the way of the Id1-E2-2 interaction and the downstream targets in mouse marrow-derived EPCs by functional tests using ChIP、site-specific mutagenesis、luciferase-report system, gene transfection technology, and etc, to explore the regulatory role and mechanism of ID1-E2-2 interaction on EPCs proliferation in vascular re-generation. Furthermore, the establishment of mouse arterial injury model is used to study the effect of the ID1-E2-2 interaction on the participation of EPCs in injuried vascular repair. The study expects to provide a new theoritical basis for the improvement of benign endothelial re-generation and for the treatment of vascular disease.

内皮前体细胞（EPCs）在血管再生修复中发挥重要作用，增强EPCs增殖能力，对提升EPCs移植治疗血管损伤性疾病具有重要意义。我们研究发现，转录因子ID1对EPCs增殖有显著促进作用，进一步通过酵母双杂交筛选发现ID1和E2-2存在相互作用。推测:ID1可能和E2-2结合，抑制E2-2转录活性，促进EPCs 增殖。基于上述假说，本项目拟以小鼠骨髓源EPCs为研究对象，采用ChIP、定点突变、荧光报告素酶和基因转染等技术，通过功能试验明确ID1-E2-2相互作用的方式及下游靶点，探讨ID1-E2-2相互作用对EPCs增殖的调控作用及机制；在此基础上建立小鼠动脉损伤模型，研究ID1-E2-2相互作用后对EPCs增殖参与损伤血管修复中的作用。研究结果期望为促进损伤内皮有益再生和改善血管性疾病的治疗提供新的研究依据。

内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells，EPCs）在血管再生修复中发挥重要作用，增强EPCs增殖能力，对提升EPCs移植治疗血管损伤性疾病具有重要意义。前期的研究发现，转录因子ID1对EPCs增殖有显著促进作用，酵母双杂交试验发现ID1与转录因子E2-2存在相互作用。本项目以小鼠来源EPCs为研究对象，构建过表达ID1、E2-2病毒载体，利用siRNA转染沉默基因表达、ChIP，荧光素酶报告基因等实验技术进行科学研究，通过实验我们证实：1. 过表达E2-2抑制EPCs增殖，干扰E2-2表达，促进EPCs增殖，同时发现，E2-2负性调控EPCs内ID1表达；2. ID1通过激活Wnt2信号通路，促进EPCs增殖周期进程，进而引起EPCs增殖；3. E2-2通过下调自噬水平，抑制EPCs增殖能力；4. ID1与E2-2相互作用，减弱E2-2对FGER1和VEGFR2的抑制作用，促进EPCs增殖；5.ID1通过helix-hoop-helix结构域与E2-2结合，抑制E2-2的表达，进而促进EPCs的增殖与迁移。. 综上，本课题按照既定的实验计划，通过系统的实验研究，证实了ID1、E2-2对EPCs增殖迁移的影响以及内在机制，包括Wnt2信号通路、自噬等在其中的调控作用， 以及ID1与E2-2相互作用的方式、作用靶点。研究结果，将为促进损伤血管内皮有益再生和改善血管性疾病的治疗提供新的理论依据。