核受体LXRs在胆固醇调节EPCs促进损伤血管再内皮化中的作用及机制

高胆固醇血症是动脉粥样硬化的危险因素，然而适度的胆固醇对维持机体正常生理功能是非常重要的。最近发现，适度增高的胆固醇可通过调节内皮祖细胞（EPCs）的增殖能力来促进损伤血管再内皮化，但机制有待进一步明确。胆固醇可通过氧化甾醇的生成激活核受体LXRs；LXRs调节其靶基因的转录，参与相应的生理和病理生理过程。课题组预实验证实了EPCs中LXRs的功能性表达，激活LXRs可增强EPCs的增殖能力；推测LXRs可能通过PI3K/Akt→eNOS调节EPCs的增殖能力并介导胆固醇调节EPCs促进损伤血管再内皮化的过程。本项目拟通过RNAi、Western blot等探索LXRs调节EPCs增殖的分子机制，通过RNAi干预LXRs的表达、EPCs移植和颈动脉损伤模型阐明LXRs在胆固醇调节EPCs促进损伤血管再内皮化中的作用。研究结果将为探索血管内皮再生机制和高胆固醇血症治疗方案的优化提供新思路。

本项目通过观察肝X受体(LXR)激活对血管内皮细胞(ECs)与内皮祖细胞(EPCs)生物学功能的影响，以及促损伤血管内皮再生与修复的效能，探讨了相关分子机制，为血管损伤性疾病的防治提供了新的靶点。项目按计划内容已基本完成。(1) LXR激动剂T0901317(T0)干预可明显增加颈动脉损伤后第4天、7天和14天的再内皮化面积。(2)不同浓度T0处理后，人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖和迁移能力明显增强，并与T0呈一定的剂量依赖关系。T0呈时间和剂量依赖的上调HUVECs中p-Akt-Ser473和p-eNOS-Ser1177的表达。PI3K抑制剂LY294002(LY)或eNOS抑制剂L-NAME预处理HUVECs后，T0促进 HUVECs增殖和迁移的效应明显减弱，提示激活LXR可以通过PI3K/Akt/eNOS信号途径增强HUVECs的增殖、迁移能力。(3)不同时间点培养的大鼠BM-EPCs和小鼠Spleen-EPCs中，均检测到LXRα、LXRβ mRNA和蛋白的表达。LXR激动剂T0和GW3965(GW)处理EPCs后，LXR的靶基因ABCA 1的转录水平明显上调，提示LXR在EPCs具有转录活性和生物学功能。T0和GW处理后，EPCs的增殖和迁移能力均明显增强，并与LXR激动剂呈一定的剂量依赖关系。并且T0和GW处理可呈时间和剂量依赖的上调EPCs中p-Akt-Ser473和p-eNOS-Ser1177的表达，LY可以明显阻断上述作用。采用LY或L-NAME预处理EPCs后，T0和GW促进 EPCs增殖和迁移的效应明显减弱，而LY和L-NAME并没有改变EPCs的细胞活力和基础迁移水平；提示激活LXR可以通过PI3K/Akt/eNOS信号途径增强EPCs的增殖、迁移能力。(4)T0作用后，EPCs中促血管生长因子VEGF mRNA的表达水平显著上调。并且，T0和GW均能呈时间和剂量依赖的上调EPCs中VEGF mRNA的表达，呈剂量依赖的上调VEGF蛋白的表达并能促进VEGF的分泌。综上所述，激活内源性LXR可能通过：(1)增强ECs的增殖和迁移能力，(2)增强EPCs的增殖和迁移能力，(3)上调EPCs中VEGF的表达和促进VEGF的分泌，来促进损伤血管的内皮再生和修复，提示LXR可能是治疗血管损伤性疾病的新的分子靶点。