厚朴酚对cajal细胞在脓毒症所致胃肠运动障碍中作用机制的影响及其对kit/SCF信号通路调控机制的实验研究

Cajal细胞是胃肠道运动基本电节律的起搏细胞，在脓毒症所致胃肠功能运动障碍中起关键作用，但脓毒症时内毒素等致病因素是如何作用于cajal细胞，以及cajal细胞如何调控下游平滑肌起搏的信号通路尚不清楚。本研究以免疫荧光细胞化学双重染色观察厚朴酚对脓毒症小鼠cajal细胞、iNOS阳性神经元的形态学影响以及厚朴酚在脓毒症小鼠胃肠动力障碍中的作用和对肠道组织氧自由基代谢的影响。深入研究胃肠运动的基本功能单位：肠神经-cajal细胞-平滑肌网络的作用机制，以及对脓毒症时cajal细胞kit/SCF信号通路的影响，从分子和细胞水平揭示脓毒症胃肠动力障碍发生发展的机制并论证了中医脾胃气机升降理论的科学性。

目前，脓毒症仍是休克、严重烧伤创伤以及重大手术等危重病人死亡的重要原因。越来越多证据表明，肠道粘膜功能受损导致细菌移位对于脓毒症的发生发展起着重要作用。关于脓毒症时胃肠道运动功能障碍的发生机制目前仍未完全阐明。Cajal细胞(Interstitial cells of Cajal, ICC) 作为一种特殊的间质细胞，以细胞网络的形式分布于整个胃肠道。研究表明：ICC在调节胃肠道平滑肌运动中发挥重要作用，它不仅是胃肠基本电节律的起搏器，也参与其传导，并对神经肌肉信号传导起重要调节作用。Kit/SCF信号通路对ICC的发育、增殖和生理功能都具有重要的作用。厚朴作为理气中药,具有降逆平喘、温中止痛、行气除满之功效。动物研究证实,该药能明显改善试验动物的胃动力和肠道传输，改善内毒素休克时胃肠电活动的抑制。.本项目主要研究内容包括：（1）检测小肠碳末推进百分率，测定离体小肠平滑肌肌条自主节律性收缩的波幅和波长。分别观察其对脓毒症小鼠的胃肠动力的影响。观察厚朴酚对cajal细胞和iNOS阳性神经元的形态学变化和肠道组织氧自由基代谢的影响，研究其对脓毒症所致胃肠动力障碍的作用机制。（2）通过测定小肠平滑肌条iNOS mRNA表达，以及ckit基因的RTPCR和干细胞因子（SCF）的Western blot蛋白定量分析，深入探索厚朴酚通过kit/SCF信号通路调控cajal细胞生理功能的作用机制。.本项目研究结果表明：脓毒症时cajal细胞形态发生明显变化。肠道氧化应激、SCF蛋白表达下降和AKT mRNA表达抑制所致的c-KIT信号通路阻断是胃肠运动障碍的重要发生机制。厚朴酚可以改善脓毒症所致胃肠运动障碍。拮抗氧化应激和调控c-KIT信号通路可能是其产生这一作用的机制。.本项目诠释了脓毒症时肠神经-cajal细胞-平滑肌网络变化，分别从整体、系统、分子和细胞水平探索脓毒症胃肠动力障碍发生发展的机理。深入研究脓毒症时cajal细胞kit/SCF信号通路的变化，从分子基因水平揭示厚朴酚在脓毒症所致胃肠运动障碍中的作用机制。本项目以莫沙必利为阳性对照药物，研究厚朴酚对脓毒症小鼠的胃肠动力障碍的作用机制，论证中医脾胃气机升降理论的科学性。建立厚朴“胃肠促动中药”的新概念。