血管内皮生长抑制因子174负向调节肾透明细胞癌生长的功能域研究

Radical nephrectomy is the primary method in renal cell carcinoma treatment. However, the carcinoma recurrent rate was high after operation. Chemotherapy and radiotherapy had poor effect in renal cell carcinoma. Moreover, the effect of target therapy with antiangiogenesis was also limited because the other angiogenesis pass way will be actived following a tumor angiogenesis inhibiting therapy. We need investigate other angiogenesis pass way in renal cell carcinoma urgently.According to the results of our pre-studies, vascular endothelial growth inhibitor 174 (VEGI-174) could induce apoptosis of vascular endothelial cells and inhibit activation of some kind of tumor cells in presence with death receptor 3. Full length forcing expression of VEGI 174 could suppress growth of renal cell carcinoma in vivo. Moreover, different function domain forcing expression of VEGI 174 could suppress activity of vascular endothelial cells. In this study, using BALBc nu/nu nude rats, cell lines of renal cell carcinoma, we want to analyze the role of different function domain of VEGI 174 in aggressive of renal cell carcinoma, in microvessel density, in growth of renal cell carcinoma cell lines in animal model, and in function test of cell lines. We expected that the results of our study could clarify the role of different function domain of VEGI 174 in the development of renal cell carcinoma, and may provide a clue for anti-angiogenesis in renal cell carcinoma.

针对肾细胞癌治疗以根治手术为主，术后复发率高，放化疗效果不佳，现有靶向治疗抑制肿瘤微血管生成一段时间后，其它微血管生成通路继发激活，致疗效不佳，迫切需要深入研究其它通路调节肾细胞癌微血管形成机制的现状；根据血管内皮生长抑制因子174（VEGI174）在死亡受体3存在时可诱导血管内皮细胞凋亡并抑制肿瘤细胞功能的报道，及在前期基金资助下研究发现全长VEGI174过表达可抑制体内肾细胞癌生长、过表达VEGI174不同片段可调节血管内皮细胞功能的结果；我们准备以肾细胞癌细胞系和BALBc nu/nu 裸鼠为实验对象，应用Q-PCR、质粒转染、蛋白质合成、细胞和动物试验等方法，检测不同VEGI174功能域的结构、及其对肾细胞癌细胞系功能的影响、对肾细胞癌体内生长、微血管密度和其临床恶性程度的影响，为阐明VEGI174在肾细胞癌发展中不同功能域的作用、进一步研究新型肾细胞癌微血管生成抑制药物提供线索

肾癌治疗以根治手术为主，术后复发率高，放化疗效果不佳，现有靶向治疗抑制肿瘤微血管生成一段时间后，其它微血管生成通路继发激活，疗效不佳，迫切需要深入研究其它通路调节肾癌微血管形成机制；血管内皮生长抑制因子174（VEGI174）可诱导血管内皮细胞凋亡并抑制肿瘤细胞功能，在前期基金资助下研究发现全长 VEGI174 过表达可抑制体内肾细胞癌生长、过表达VEGI174不同功能片段可调节血管内皮细胞功能。因此，我们以肾癌细胞系和BALBc nu/nu 裸鼠为实验对象，应用Q-PCR、质粒转染、蛋白质合成、细胞和动物实验等方法，检测不同VEGI174功能域对肾癌细胞系功能的影响、对肾癌体内生长、微血管密度和肾癌恶性程度的影响；为进一步明确VEGI相互作用蛋白，我们进行了蛋白牵出试验，筛选出可能与VEGI相互作用的蛋白；在保证原计划顺利实施的基础上，我们对研究的内容进行了扩展和延伸，初步探索应用原发肾癌灶及其转移灶标本制作相应PDX模型，应用肾癌靶向药物进行干预，记录肿瘤生长情况，并对肿瘤组织进行转录组测序。结果提示VEGI174的功能域片段V7和V8在肾癌中发挥明显抑制作用；过表达V7和V8对肾癌细胞增殖无明显影响但可抑制上皮间质转化过程；应用合成的VEGI174蛋白、V7和V8多肽处理786-O和A498肾癌细胞能够抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力，动物体内实验提示其能够在体内抑制种植瘤的生长且安全性良好；蛋白迁出试验发现ATP 柠檬酸裂解酶 (ACLY) 和烯醇化酶1异构体(Endose-1) 可能与VEGI174相关；原发病灶较转移灶的PDX肿瘤中有1725个基因表达量升高5倍以上，转移灶中有994个基因的表达量比原发灶中高5倍以上，结合患者临床肾癌靶向药物治疗效果和PDX肿瘤生长情况，提示肿瘤的异质性与靶向药物治疗反应的差异存在相关性。此研究结果为进一步开发VEGI174功能片段V7和V8多肽的临床应用提供了重要的实验依据和线索；在临床中对肾癌患者的肿瘤组织进行多点取材并进行基因分析有利于综合全面地帮助患者制定临床治疗的决策。