Y-27632对慢性移植肾失功的治疗作用及分子机制：依赖于调节细胞紧密连接/VHL通路拮抗EMT的新途径

慢性移植肾失功是多年来的研究重点和难点。本研究旨在运用Rho特异性抑制剂Y-27632，从调节细胞紧密连接(TJ)相关蛋白表达入手，从动物、细胞水平寻找减轻肾小管上皮细胞骨架损伤，治疗慢性移植肾失功的新方法。构建大鼠CAD模型，于不同阶段取材，采用激光微分离、RT-PCR、Western和共聚焦显微镜等方法观察、检测肾小管上皮细胞TJ相关跨膜蛋白表达变化和Y-27632的影响；其次，培养大鼠TEC细胞，予TGF-b刺激和Y-27632拮抗，从mRNA和蛋白水平观察TEC上相关TJ蛋白表达情况；第三，以VHL siRNA转染人肾小管上皮细胞，同时叠加TGF-b干预，并用Y-27632拮抗VHL表达下调和TGF-b刺激诱导的协同作用，检测细胞骨架蛋白的表达变化，观察Y-27632对小管上皮细胞TJ的保护作用。

慢性移植肾失功是多年来的研究重点和难点。项目按原预期目标进行：运用Rho特异性抑制剂Y-27632，从调节细胞紧密连接(TJ)相关蛋白表达入手，从动物、细胞水平研究Rho抑制剂对肾脏病变的保护作用和机理。.本项目按原计划进行，进展顺利。从实验室构建大鼠CAD模型，于不同阶段取材，采用激光微分离、RT-PCR、Western和共聚焦显微镜等方法观察、检测肾小管上皮细胞TJ相关跨膜蛋白表达变化和Y-27632的影响；在体外培养肾小管上皮细胞（TEC细胞），予TGF-b刺激和Y-27632拮抗，从mRNA和蛋白水平观察TEC上相关TJ蛋白表达情况；以VHL siRNA转染人肾小管上皮细胞，同时叠加TGF-b干预，并用Y-27632拮抗VHL表达下调和TGF-b刺激诱导的协同作用，检测细胞骨架蛋白的表达变化，观察Y-27632对小管上皮细胞TJ的保护作用。.结果进一步证明，Y-27632可有效的抑制肾小管上皮细胞发生的EMT改变，可望成为抗肾脏纤维化的药物，值得进一步研究。