免疫促凋亡蛋白对HER2阳性Herceptin耐药肿瘤及转移性乳腺癌杀伤作用的研究

HER2在乳腺癌等多种肿瘤过表达，与肿瘤的转移和预后密切相关，是抗肿瘤治疗的理想靶点。Herceptin是第一个被批准用于乳腺癌治疗的分子靶向药物，但是Herceptin的客观反应率较低，且多数患者在1年内出现获得性耐药，因此探讨耐药机制并寻找对策对于乳腺癌的临床治疗具有重大意义。我们的前期研究成果表明免疫促凋亡分子发挥作用不受EGFR受体家族其他成员及HER2下游信号通路的影响，有望用于HER2阳性Herceptin耐药肿瘤的治疗。本项目拟在此基础上对免疫促凋亡分子的转膜结构域进行改造，设计和筛选多种膜转运结构域，研究和比较它们在耐药细胞中的转运效率和机制，筛选出转运率较好的结构域用于构建新型免疫促凋亡分子，希望其一经内化迅速进入胞浆发挥作用，从而避免细胞表面蛋白位阻效应引起的耐药，使免疫促凋亡分子在临床上具有更广阔的应用前景。

本研究中构建了含有三种Furin酶切位点的不同转位肽编码区：1）PE（273-282 aa）；2）DT（187-196 aa）；3）9聚精氨酸的重组Immuno-tbid基因，分别命名为e23sFv-fPEBid，e23sFv-fDTBid和e23sFv-9RBid，将其瞬时转染HER2阳性肿瘤细胞人乳腺癌SKBR-3细胞和人胃癌SGC7901细胞，转染72h细胞计数和MTT实验证实，三种免疫促凋亡分子均可以抑制HER2阳性肿瘤细胞的生长，其中以e23sFv-fDTBid的杀伤作用较强。由于免疫促凋亡蛋白在内吞体被Furin切割后，促凋亡分子从内吞体释放入胞浆才能发挥杀伤作用，已知流感病毒血凝素HA2结构域能够破坏内吞体膜稳定性，有利于内吞体中的物质释放入胞浆，因此，我们将HA2与免疫促凋亡分子e23sFv-fDTBid融合，构建了e23sFv-fdt-HA2-tBid和e23sFv-fdt-tBid-HA2两种新型免疫促凋亡分子。同时，建立了Herceptin耐药细胞株和乳腺癌肺转移细胞株，体外细胞学实验证实这两种新型免疫促凋亡分子可以抑制Herceptin耐药细胞株和乳腺癌肺转移细胞株的生长并诱导其凋亡，其中以e23sFv-fdt-tBid-HA2的作用较强。建立乳腺癌肺转移小鼠模型，用这两种新型免疫促凋亡蛋白进行治疗，结果证实这两种新型免疫促凋亡蛋白均能抑制肿瘤的生长，延长小鼠生存期，其中以e23sFv-fdt-tBid-HA2的抑瘤效果最好。.综上所述，通过本研究获得了能用于Herceptin耐药肿瘤和乳腺癌肺转移治疗的新型免疫促凋亡分子e23sFv-fdt-tBid-HA2，该研究使免疫促凋亡分子具有更广阔的应用前景，同时为Herceptin耐药肿瘤及乳腺癌肺转移肿瘤的治疗提供新的策略。