肝癌细胞来源外泌体介导miR-335 激活肝成纤维细胞的研究

How hepatic fibroblasts (HSCs) are activated by hepatocellular carcinoma (HCC) cells and how they promote tumor progression after activation are still unclear. Our previous studies found that co-cultured HSC and HCC cells could promote the proliferation and invasion of HCC. The expression of miR-335-5p in both cells after co-culturing decreased, and exosome transport existed between cells. By microRNA array analysis, the target molecules of miR-335-5p include EIFIC2, which could negatively regulates PTEN expression and activates vascular endothelial growth factor. Therefore, we speculate that HSC is activated by exosome-loaded miR-335-5p via EIF2C2/PTEN/PDK1/AKT pathway. Activated HSC promotes tumor progression by secreting inflammatory factors and inducing angiogenesis. In this project, we will take advantage of immunofluorescence, Edu, CCK-8, WB, scratch and migration experiments to analyze the activation and function of HSC at in vitro and in vivo levels. Furthermore, we will use microRNA transfection, PTEN and AKT inhibitors to explore the activation of HSC through EIF2C2/PTEN/PDK1/AKT pathway. We will further investigate the inflammatory factors, angiogenesis and lipid metabolism of activated HSC. This project will provide a basis for further clarifying the interaction mechanism between HCC and HSC.

肝脏成纤维细胞（HSC）如何被肝癌细胞（HCC）激活及活化后如何促进肿瘤进展的机制尚不明确。我们前期研究发现HSC与HCC共培养后促进HCC增殖侵袭，miR-335-5p表达降低，细胞间存在外泌体转运，miRNA array 分析miR-335-5p的靶分子包括EIFIC2，EIFIC2负调节PTEN表达，激活VEGF。因此，我们推测HCC由外泌体介导miR-335-5p通过EIF2C2/PTEN/PDK1/AKT 通路激活HSC。HSC通过分泌炎性因子，诱导血管生成促进肿瘤进展。本项目中，我们通过免疫荧光、Edu、CCK-8、WB、划痕、迁移实验在细胞和动物水平分析HSC活化及活化后的功能。通过miR转染及相关抑制剂研究miR-335-5p通过EIF2C2/PTEN/PDK1/AKT 通路激活HSC。分析活化HSC炎性因子，血管生成及脂质代谢。为进一步明确HCC与HSC互作机制提供基础。

有研究表明肝脏成纤维细胞（HSC）与肝癌细胞（HCC）之间存在相互作用，但HSC如何被HCC激活及活化后如何促进肿瘤进展的机制尚不明确。在该课题中，我们通过各种研究方法发现肝癌细胞来源的外泌体可以在体外和动物体内激活肝脏成纤维细胞，使其具有增殖加快、迁移侵袭能力增强、促进肿瘤生长的功能。该项目进一步研究了这种作用的深层机制，证实是通过激活EIFIC2，从而抑制PTEN, 再激活PDK1和AKT 而发挥功能。而活化的HSC 可以促进IL-6，IL-8，IL-17A，CXCL7，PGE2等炎性因子的表达，并促进脂质代谢，以及一些血管生成因子如VEGF-α、 MMP2、MMP9和TGF-β的表达，从而促进肿瘤的发生发展。肝癌细胞来源的外泌体中miR-335-5p的表达显著降低。该项目研究表明在HCC来源的外泌体中转染miR-335-5p作用于肝脏成纤维细胞后，可通过抑制EIFIC2，从而激活PTEN, 再通过抑制PDK1和AKT 而逆转HSC 的活化，并抑制HSC炎性因子、脂质代谢以及血管生成因子的表达。因此，外泌体包裹的miR-335-5p 可作为逆转肝纤维化、治疗肝癌的有效策略。该课题的研究意义在于进一步深入阐明了肝癌与肝纤维化之间可能存在的联系，探讨了疾病发生发展的机制，并提供了一种可能有应用前景的治疗策略。