Tumstatin作用于整合素αVβ3抑制肝癌血管生成机制的研究

血管生成在肝癌生长和转移中起着重要作用。研究表明Tumstatin与整合素αVβ3结合并选择性地定位于肿瘤血管内皮细胞而发挥作用，但关于Tumstatin与整合素αVβ3结合后影响肿瘤新生血管生成、凋亡和Tumstatin与αVβ3整合素受体相互作用机制，尚需进一步研究。我们前期研究发现，封闭整合素αVβ3基因能够抑制肝癌新生血管形成、诱导凋亡，并且成功构建了Tumstatin表达载体并验证其活性。在此基础上，拟通过比较Tumstatin多肽和整合素αVβ3的反义基因对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、肝癌细胞和肝癌裸鼠皮下移植瘤模型生物学特性的影响，利用基因芯片技术筛选肿瘤信号转导、凋亡相关基因和血管生成相关信号通路并进一步验证，揭示整合素αVβ3与Tumstatin之间的作用机制，寻找新的抗肿瘤新生血管的治疗方法。

原发性肝癌在世界上常见的恶性肿瘤中排第六位，在癌症致死的相关肿瘤中排第三位，仅次于胃癌和食管癌，每年都有超过50,0000的新增病例，同时更是我国常见的恶性肿瘤之一。肝癌具有双重血液供应系统，静脉和淋巴引流途径较多，具有生长迅速、易肝内转移及远处转移的特点，肝细胞肝癌对单一化疗或放疗的效果不理想，所以肝癌的治疗多采用药物联合的方式，可有效提高肝癌的治愈率及改善预后。研究表明，血管内皮细胞可以通过旁分泌途径分泌血小板源性生长因子，白介素-6，表皮生长因子等20余种刺激肿瘤细胞生长相关的因子，抗血管生成治疗目前也逐渐成为肿瘤研究的重点和热点之一。研究发现Tumstatin是整合素α3β1，αVβ3的作用蛋白，针对Tumstatin进行肝癌抗血管生成治疗为其治疗提供了新的思路。COX-2在肝癌组织中高表达，其表达与肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡能力密切相关。C0X-2的高表达，激活了肿瘤细胞的凋亡逃避机制，促进了肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭并抑制了凋亡。因此抗血管药物与C0X-2选择性抑制剂--meloxicam的联合对肝癌治疗具有重要的意义。方法：检测Tumstatin（74-98）多肽对HUVEC细胞增殖、粘附、迁移、侵袭及凋亡能力的影响；检测HepG2细胞在Meloxicam处理前后，肿瘤细胞增殖、粘附、迁移、侵袭及凋亡能力的变化；检测meloxicam不同时间点处理后，肿瘤细胞凋亡相关蛋白的表达变化，并检测出COX-2产物PGE2依赖相关的蛋白的表达变化；裸鼠皮下成瘤，检测抗血管多肽Tumstatin74-98联合meloxicam对肝癌裸鼠皮下模型的联合治疗作用。结果: （1）抗血管多肽Tumstatin（74-98）对血管内皮细胞具有抑制增殖、迁移、侵袭及促进凋亡的作用，但对肝癌HepG2细胞无明显的作用。（2）Meloxicam可通过抑制肿瘤细胞增殖、粘附、迁移、侵袭及促进凋亡发挥抗肿瘤作用。（3）Meloxicam可促进肝癌细胞凋亡的发生，可同时通过COX-2依赖的机制和COX-2非依赖的机制来进行。（4）抗血管多肽Tumstatin（74-98）联合Meloxicam能够明显抑制裸鼠移植瘤的生长。结论：抗血管多肽Tumstatin（74-98） 联合Meloxicam在肝癌的治疗中具有协同作用。