基于肠道微环境探讨四君子汤通过“扶正”干预哮喘的分子机理研究

Bronchial asthma is Chronic allergic disease. Asthma is a popular public disease with specific pathological feature of airway allergic inflammation and airway high reactivity.We believe that heredity and environment cause asthma. The inner wall of the intestinal tract is the largest area of contact with the outside environment. There are a large number of intestinal flora and intestinal immune microenvironment in the intestinal tract.They form an intestinal microenvironment together.The intestinal microenvironment is associated with a variety of immune diseases.We consider intestinal microenvironment to be the connection hub of internal and external factors in asthma.So We select the traditional chinese medicine prescription “SiJunZi” for strengthening spleen-stomach at the rats of asthma or intestinal microenvironment disturbance or both by “FuZhengQuXie” wholism. We analyze the dynamic changes of immune cells,immune molecules and the structure of the intestinal flora during the process of intestinal microenvironment disorder and asthma to explore the molecular mechanism of the” SiJunZi” act on asthma by “FuZheng”to promote the stability of intestinal microenvironment, regulate the local and overall immune function. Provide theoretical basis for the prevention and treatment of asthma in traditional Chinese Medicine.

支气管哮喘是一种慢性过敏性炎症性复杂疾病，以气道变应性炎症和气道高反应性为主要特征。支气管哮喘的发生与发展是基因、环境因素共同参与的结果。肠道内壁是机体与外界环境接触面积最大的部位，大量定居其中的肠道菌群与机体的肠道免疫微环境共同构成肠道微环境。肠道微环境的变化既是疾病的果，也同时是机体受多因素影响的内在表现而成为疾病的因。本研究以肠道微环境作为哮喘内因外因相关性的连接枢纽，根据中医“扶正”的治则与思路，应用中医经典方四君子汤，益气健脾，行气化滞，调节胃肠道机能，从对肠道微环境“扶正”的角度，采用实时定量PCR、高通量测序等技术方法分析模型大鼠肠道微环境紊乱和哮喘发生过程中关键的免疫细胞、免疫分子、肠道菌群结构的动态变化，探讨四君子汤“扶正”促进肠道微环境稳定，调节机体局部及整体免疫功能，改善哮喘的发生发展的分子机制，诠释四君子汤“扶正”的现代内涵。

人体肠道菌群与肠道免疫微环境共同组成了肠道微环境，两者之间彼此影响，又作为一个整体对健康和疾病产生影响。免疫失衡是目前哮喘公认的主要发病机制之一，故以此为切入点，探索免疫平衡态的局部与整体、肠道免疫微环境与肠道菌群的内在联系，并从中医药中寻求多靶点、多途径防治哮喘的策略。课题组采用流式细胞术、实时定量PCR、蛋白免疫印迹法、高通量测序等技术通过动物实验探究肠道菌群紊乱和哮喘发生过程中关键的免疫细胞、免疫分子、肠道菌群结构丰度的变化，并试图探索四君子汤通过维持和促进恢复肠道微环境的健康态，改善哮喘的作用机理。.研究表明：.1.哮喘模型动物肺组织病理、气道阻力、T细胞亚群（Th1、 Th2、Th17、Treg）比例、转录因子、细胞因子、肠道菌群结构丰度均发生不同程度的受损和失衡表现，且模型4周变化最为突出，四君子汤对上述变化均有不同程度的调节作用，中剂量4周组效果最为显著。.2.抗生素干扰的菌群紊乱模型动物肠道黏膜紧密连接蛋白表达下降，部分细胞因子、过敏介质水平上升，TLR表达发生改变，哮喘和菌群紊乱复合模型上述变化更为显著，且抗生素使用时长与上述变化成正相关。.3.哮喘模型和哮喘菌群紊乱复合模型均出现局部和全身免疫失衡、肠道菌群改变，复合模型更为显著和突出，四君子汤干预后，两种模型动物的各指标均有改善。.综上，课题组初步明确：.1.肠道菌群紊乱会改变机体免疫稳态，加重哮喘动物免疫失衡，TLR可作为监测靶标及时反映肠道菌群-免疫平衡的联动状态。.2. Th1/Th2、Treg/Th17平衡发生偏移，以Th2、Th17细胞为主导或功能活跃的倾斜是哮喘免疫失衡的重要分子机制；四君子汤“扶正”改善哮喘动物内环境稳态，既表现在维护免疫平衡，亦表现在恢复机体与菌群之间的健康态，既可作用于局部，亦可泛化至全身。