基于和合思想探究调和气血法调控VEGF-Ang-Notch通路及miRNA干预COPD肺血管重构机制

Pulmonary vascular remodeling is chronic obstructive pulmonary disease (COPD) key mechanism of airway remodeling,VEGF-Ang-Notch signaling pathwaysplay an important role.Based on the previous research,COPD rats in the pathways related to abnormal expression of miRNA,Reconcile qi and blood methodmedicine by VEGF obviously,But regulatory mechanism is unclear.Thought the essence of harmony is the overall coordination,Reconcilemethod is the best method.Therefore，Reconcile qi and blood methodmay through regulating repair VEGF –Ang- Notch signaling pathways disorderly state and abnormal miRNA, to delay or prevent COPD pulmonary vascular remodeling progress ofhypothesis.This study intends to use the COPD rats model,byReal-timePCR, western blot, high-throughput sequencing and bioinformatics technique, system researchReconcile qi and blood method in the molecular mechanisms of pulmonary vascular remodeling in COPD:the regulation of TNF alpha, IL - 8, VEGF, Ang, Notch and establish verification miRNA expression profile.At the same time to drug serum direct effects on endothelial cell injury inducedmodel, further observation above indicators prove hypothesis. To clarify miRNA expression profile and the mechanism of action of the pulmonary vascular remodeling with COPD, the prevention and treatment of COPD Basictheory of TCM and clinical practice is of great significance.

肺血管重构是慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑关键机制，VEGF-Ang-Notch通路发挥重要作用。前期研究发现：COPD大鼠中该通路相关miRNA表达异常，调和气血法可下调VEGF表达，但调控通路及miRNA机制尚不明确。和合思想精髓为整体协调，求衡乃中医理论体系核心。故提出基于和合思想的调和气血法可能修复调控VEGF-Ang-Notch通路失衡失序及miRNA，干预COPD肺血管重构的假说。研究拟利用COPD大鼠模型，采用实时定量PCR、蛋白免疫印迹法、高通量测序、生物信息学等技术方法，对该法干预COPD肺血管重构的分子机制进行系统研究：调控TNF-α、IL-8，VEGF、Ang、Notch及建立验证miRNA表达谱。同时以药物血清作用内皮细胞损伤模型，观测上述指标进一步论证假说。阐明该法干预COPD肺血管重构的分子机制及miRNA表达谱，对诠释中医基础理论和治则治法具有重要意义。

气道炎症贯穿COPD始末，各种炎症介质释放，加剧炎症反应对血管的刺激，导致血管结构和功能异常，引起气道上皮组织化生等气道管壁结构变化，影响气道重塑。学者提出，COPD早期可能就出现肺血管重构，极大增加了COPD心血管合并症出现的风险。故以肺血管重构为研究切入点，并从中医药中寻求多靶点、多路径防治该病的策略对延缓COPD进展具有重要意义。.课题组采用免疫组织化学法、实时定量PCR（Real-Time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western-blot）、高通量测序（High-throughput sequencing）、生物信息学等技术方法，通过动物实验和细胞实验开展实验研究，以期探究COPD肺血管重构的可能分子机制，并试图探索调和气血法方药的作用机理。.研究表明：.1.模型动物气道重塑和血管重构指标以及肺功能、肺血流动力学和血氧饱和度等指标均有不同程度受损，调和气血方干预后，即便有所缓解，但仍不能恢复至正常状态。.2.模型动物炎性因子TNF-α、IL-8以及VEGF、VEGFR-1、Ang-1、Tie2、Notch1等VEGF-Ang-Notch通路相关因子均有不同程度的异常变化，调和气血方对上述指标均有不同程度的调节作用，中剂量效果最为显著。.3.模型动物miRNA研究发现共有22个miRNAs上调，32个miRNAs下调。其中novel-47-mature 、novel-51-mature和novel-76-sta与血管生成和炎症调节相关。miR-21和miR-126显著降低，而miR-221/222则显著升高，调和气血方干预后，miR-126表达有不同程度的升高，高剂量效果明显；miR-221/222表达有不同程度的降低，但量效关系不明显。.4.在细胞损伤模型中也对上述指标进行了离体实验验证，结果与体内实验基本一致，含药血清方面CSE+5%含药血清组效果最佳。.综上，课题组初步明确：.1.TNF-α、IL-8等炎症介质“溢出”进入血循环诱导血管内皮细胞、平滑肌细胞相关因子VEGF、Ang、Notch及miR-126、miR-221/222表达异常，导致VEGF-Ang-Notch通路失衡失序，可能COPD肺血管重构分子机制之一。.2.基于和合思想的“调和气血法”可能通过干预COPD气道炎症反应，抑制VEGF、Ang及miR-221/222的过度表达，促进miR