通过测评树突-T细胞功能探讨中医"扶正"疗法机理

中医"扶正"疗法治疗恶性肿瘤被广泛应用，但仍缺乏坚实的理论依据。"扶正"疗法的主要内涵为益气补肾方法，我们在既往的临床试验中，在使用益气补肾中药的患者中发现增强的细胞免疫反应，而有效人体的细胞免疫有赖于树突状细胞与T细胞的共同作用，尤其树突状细胞，作为专业抗原递呈细胞，其功能的改变，在肿瘤免疫耐受的过程中起到重要作用。通过益气补肾中药治疗，增强对肿瘤特异性抗原敏感的树突状细胞的抗原递呈能力，促进T细胞功能，是一个很有潜力的治疗思路。本课题拟通过此思路深入探讨中医"扶正"疗法治疗恶性肿瘤的部分作用机理。

本课题通过评价益气补肾中药对肾癌小鼠树突-T细胞功能的影响，探讨中医“扶正”疗法治疗恶性肿瘤的部分作用机理。在既往的临床试验中，我们在使用益气补肾中药的患者中发现增强的细胞免疫反应，而有效人体的细胞免疫有赖于树突状细胞与T细胞的共同作用，尤其树突状细胞，作为专业抗原递呈细胞，其功能的改变，在肿瘤免疫耐受的过程中起到重要作用。本实验主要内容是分离小鼠脾脏树突状细胞，测定其抗原提示功能。小鼠脾脏树突状细胞按CD8α的表达水平分2个亚型，CD8α+、CD8α-树突状细胞，前者在功能上倾向于引发Th1免疫反应，激活CD4+幼稚T细胞诱导其分化成Th1细胞，进而分泌IL-2， IL-12和IFN-γ，促进细胞免疫。因为CD11c是小鼠树突状细胞特异性表面抗原,所以CD8α+树突状细胞可以在用抗CD8α和CD11c荧光抗体标记后使用流式细胞仪分离CD11c+CD8α+细胞亚群的方法来分离，同时用抗CD40,抗CD80,抗CD86和抗MHC Class II荧光单克隆抗体标记细胞，并测定这些共刺激分子在中药治疗前后的表达水平。最终实验结果表明，肿瘤细胞接种两周后，对照组及接种肿瘤组小鼠体重即出现明显的差异，肿瘤接种组小鼠体重出现明显下降。但给药后，无论是两个无瘤照组还是两个肿瘤接种组间，小鼠体重都没有显著变化；相比于对照组，给药组肿瘤体积明显小于对照组，表明中药有一定的抑瘤作用；中药给药组的肿瘤发病率要低于对照组，说明中药有一定的延缓肿瘤发生发展的作用；不同时间点给药小鼠存活率要低于对照组，表明给药后加速了荷瘤小鼠的死亡，具体原因还需要进一步研究确定，可能与补益温阳药应用时间较长有关；中药组细胞因子CD8表达低于对照组，CD80、MHCII表达高于对照组，均有显著差异，表明中药可促进树突状细胞的成熟度；体外细胞毒性测定实验显示中药组CTL活性高于对照组，有显著差异，进一步证实中药增强细胞毒性T细胞的功能；中药组IL-2可促进调节T细胞，其表达低于对照组,但无显著差异，中药组TNF-a、IFN-r、IL-12表达高于对照组，均有显著差异，表明中药有增加Th1激活进而增加细胞免疫的作用。实验结果证明通过益气补肾中药治疗，可以增强对肿瘤特异性抗原敏感的树突状细胞的抗原递呈能力，促进T细胞功能，这可能是中药抑制肿瘤进展的关键机理之一，验证了中医“扶正”疗法的有效作用。