酪氨酸蛋白激酶Fyn磷酸化雄激素受体的生物学意义研究

我们以往研究发现酪氨酸蛋白激酶Fyn在表皮生长因子（EGF）刺激前列腺癌细胞LNCaP细胞后可以磷酸化雄激素受体DNA结合结构域（AR-DBD）。本课题拟采用定点突变的方法构建不同AR-DBD酪氨酸位点的突变体，与Fyn共转染COS-1细胞，明确Fyn磷酸化AR的确切位点。利用分离细胞核/质成分和免疫荧光共聚焦的方法研究Fyn磷酸化对AR在雄激素和EGF刺激下向细胞核转位的影响。应用荧光素酶实验检测Fyn磷酸化对AR促前列腺癌特异抗原（PSA）启动子转录活性的影响。制备针对Fyn磷酸化AR位点的特异酪氨酸磷酸化抗体，检测激素依赖和非依赖前列腺癌动物模型肿瘤和人体肿瘤标本特异位点AR磷酸化状态，以明确Fyn磷酸化对AR转录活性的影响和机制，及其与激素非依赖前列腺癌之间的关系。