表皮生长因子诱导的雄激素受体磷酸化机制及在雄激素非依赖前列腺癌发生中的意义

Androgen-independent prostate cancer(AIPC) is a difficult problem clinically. It is important to explore the mechanism under the development of AIPC. Substantial evidence indicates that androgen receptor(AR) activation in the low environment of circulating testosterone has a critical role in the development of AIPC. Extracellular ligands binding to cell surface receptors and leading to AR phosphorylation through intracellular signalling transduction is considered as one of the passways of AR activation. Our previous results showed epidermal growth factor(EGF) that binds to cell surface receptor induced Tyr-267 site-specific phosphorylation of AR and enhanced prostate cancer cell proliferation. However, the detail of the intracellular signalling transduction is unclear. The main objective of this proposal is to characterize the kinase(s) involved in EGF-induced phosphorylation of AR in prostate cancer cell, clarify the regulating effect of AR phosphorylation on AR targeted gene, prostate specific antigen(PSA) , and confirm the significance of EGF-induced AR phosphorylation in AIPC by tyrosine kinase panel assay, gene transfection and knockout , Quantitative PCR, Western-blot and Chromosome immunoprecipitation, the advanced molecular biological methods.

雄激素非依赖性前列腺癌是一临床难题，探讨其发生机制具有重要意义。充分证据表明，低睾酮环境下雄激素受体激活在雄激素非依赖性前列癌发病中起关键作用。细胞外配体与细胞表面受体结合通过细胞内信号传导导致雄激素受体磷酸化被认为是雄激素受体激活的途径之一。我们研究结果表明表皮生长因子与细胞表面受体结合导致雄激素受体特异位点Tyr-267磷酸化并促进前列腺癌细胞增殖。但是，其细胞内详细传导机制不明确。本课题将应用酪氨酸激酶抑制实验，基因转染和敲除，染色体免疫沉淀，定量聚合酶连反应及蛋白杂交电泳等先进分子实验方法, 鉴定参与前列腺癌细胞表皮生长因子诱导雄激素受体磷酸化的细胞内激酶，澄清雄激素受体Tyr-267磷酸化对雄激素靶基因-前列腺癌特异抗原（PSA）的调控影响, 确定雄激素受体磷酸化在雄激素非依赖前列腺癌发生中的意义。

雄激素非依赖型前列腺癌是一临床难题，探讨其发生机制具有重要意义。充分证据表明，低睾酮环境下雄激素受体激活在雄激素非依赖性前列腺癌发病中起关键作用。细胞外配体与细胞表面受体结合通过细胞内信号传导导致雄激素受体磷酸化被认为是雄激素受体激活的途径之一。我们前期研究结果已证明表皮生长因子与细胞表面受体结合导致雄激素受体特异位点Tyr-267磷酸化并促进前列腺癌细胞增殖。但是，其细胞内详细传导机制不明确。. 本课题中，我们在前期研究结果的基础上，应用细胞培养、定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹、染色体免疫沉淀、基因转染和敲除、酪氨酸激酶抑制实验及细胞增殖等实验方法，鉴定出Ack1、Src、Tyk2为参与前列腺癌细胞表皮生长因子诱导雄激素受体磷酸化的关键细胞内激酶，雄激素受体Tyr-267磷酸化可上调雄激素靶基因-前列腺癌特异抗原并诱导前列腺癌细胞增殖，确定了雄激素受体磷酸化在雄激素非依赖前列腺癌发生中的意义，为前列腺癌进行靶向治疗奠定理论基础及提供实验依据。另外，我们发现Ack1、Tyk2及其家族成员等细胞内非受体酪氨酸激酶在其他实体瘤，如雌激素非依赖子宫内膜癌发生中起重要作用。我们进一步实验证明Ack1是表皮生长因子诱导雌激素受体Tyr-537特异位点磷酸化和子宫内膜癌细胞增殖的关键激酶，在子宫内膜癌发病过程中可能扮演重要角色，为针对子宫内膜癌的治疗提供新的思路。Tyk2为JAK家族成员，已有研究证明JAK/STAT信号通路参与多种肿瘤的发生发展，我们进一步实验发现SHP1基因启动子区CpG岛甲基化及其基因沉默导致JAK/STAT信号通路的异常激活和表达可能是引起原发中枢神经系统淋巴瘤的分子机制之一，为针对SHP1去甲基化治疗提供实验基础。