白血病细胞分化相关基因dif14不同异位剪接mRNA的克隆和功能研究

本课题以本室得到的人类基因dif14为基础开展研究，以往我们的研究发现dif14基因在表达时有两种不同长度的异位剪接产物。在这个发现的基础上，我们计划进一步利用PCR和筛选人正常肾的cDNA文库的方法，克隆dif14基因不同长度的异位剪接mRNA，原核表达纯化其编码蛋白并免疫动物制备特异抗体，检测该蛋白在人各种组织中的表达情况。分别构建真核表达载体，转染K562细胞，观察两种蛋白过表达对细胞增殖和分化的影响及区别。建立K562细胞和HL-60细胞不同的诱导分化和凋亡模型，观察dif14基因不同异位剪接产物在细胞分化和凋亡时的表达变化。构建两种转录本的可诱导表达载体，转染真核细胞，检测并比较两者过表达时肢体发育相关和髓系细胞分化相关的转录因子的表达变化。