高密度脂蛋白受体SR-BI转录后表达调控机制研究

心血管疾病是危害人类健康的主要杀手，而脂质代谢紊乱是其公认的主要危险因子。HDL受体SR-BI是参与胆固醇逆转运的关键受体，被认为是一个潜在的预防和/或逆转动脉粥样硬化的治疗靶标，对其表达调控机制的研究将有助于我们对SR-BI及其介导的胆固醇逆转运等代谢途径有更深入的认识。本项目拟利用荧光素酶报告体系确定SR-BI基因3'UTR序列所介导的转录后调控作用，进而对该3'UTR区域进行分段克隆以确定关键序列。结合软件预测等手段，寻找对该基因3'UTR起调控作用的miRNA并在细胞水平和小鼠模型上对其表达调控作用及功能影响进行验证。对3'UTR介导的SR-BI基因表达调控机理的阐明将有助于揭示SR-BI基因转录后水平调控机制，对进一步认识SR-BI在RCT等HDL介导的胆固醇代谢过程中的作用具有至关重要的意义，并将有可能为新型调血脂药物的发现提供新的药物作用靶点，具有重要的科学意义和应用价值。

心血管疾病是危害人类健康的主要杀手，而脂质代谢紊乱是其公认的主要危险因子。HDL受体SR-BI是参与胆固醇逆转运的关键受体，被认为是一个潜在的预防和/或逆转动脉粥样硬化的治疗靶标，对其表达调控机制的研究将有助于我们对SR-BI及其介导的胆固醇逆转运等代谢途径有更深入的认识。..本项目基本按照计划书内容完成，首先利用荧光素酶报告体系确定SR-BI基因3’UTR序列所介导的转录后调控作用，进而对该3’UTR区域进行分段克隆以确定关键序列。结合软件预测等手段，寻找并确定对该基因3’UTR起调控作用的miRNA。利用不同肝细胞检测了不同miRNA对SR-BI的表达调控作用，最终确定了3个可显著降低SR-BI表达水平的miRNA-miR-185、miR-96和miR-223；其抑制剂则可上调SR-BI的表达水平。另外证实这3个miRNA还可以调控SR-BI介导的HepG2细胞对DiI荧光标记的HDL的摄取作用。通过点突变的方法确定了miR-185对SR-BI基因3’UTR的直接调控作用。实验发现miR-185、miR-96和miR-223之间存在着协同调控作用。进而在高脂喂养的小鼠模型上证实了肝脏miR-185的表达水平与SR-BI基因呈负相关，说明miR-185很有可能参与了SR-BI的表达调控。随后分别采用脂质体包装及慢病毒包装等方法在动物模型进一步证实miR-185参与调控了血浆胆固醇代谢，小鼠静脉注射anti-miR-185后抑制肝脏miR-185表达，可显著降低血浆总胆固醇、LDL胆固醇水平以及血管内壁脂质的堆积。..本项目中对3’UTR介导的SR-BI基因表达调控机理的阐明将有助于揭示SR-BI基因转录后水平调控机制，对进一步认识SR-BI介导的HDL相关胆固醇代谢过程中的作用具有至关重要的意义，并将有可能为新型调血脂药物的发现提供新的药物作用靶点，具有重要的科学意义和应用价值。miR-185抑制剂则有望发展为新型的降血脂核酸药物候选物。