miR-200b/c/429功能簇对胆管癌干细胞恶性生物学行为的调控及其机制研究

我们前期研究发现，胆管癌CD24+CD44+EpCAMhigh细胞有强成瘤、自我更新和分化等肿瘤干细胞样特性，是胆管癌恶性核心细胞。但目前关于其恶性生物学行为分子机制的研究尚未见报道。microRNA对肿瘤恶性生物学行为具有极为重要的调控作用。我们前期通过芯片筛选和验证发现，miR-200b/c/429在胆管癌和胆管癌干细胞中显著低表达。已有研究表明miR-200b/c/429参与调节多种肿瘤干细胞的"干性"，但它在胆管癌干细胞中的作用和机制尚未阐明。基于以上背景，我们通过qRT-PCR和原位杂交方法进一步明确miR-200b/c/429在胆管癌干细胞中的关键亚基；构建慢病毒载体验证其对胆管癌干细胞生物学行为的调节作用；通过荧光报告素酶体系和ChIP方法检测靶基因，阐明其调控机制。以上研究有望进一步揭示胆管癌干细胞恶性生物学行为的分子机制，为特异性靶向胆管癌干细胞的分子治疗奠定基础。

我们在前期研究中发现，胆管癌cd24+cd44+EpMhigh细胞有强成瘤、自我更新和分化等肿瘤干细胞样特性，是胆管癌恶性核心细胞。但目前关于其恶性生物学行为分子机制的研究尚未见报道。microRNA对肿瘤恶性生物学行为具有极为重要的调控作用。前期我们通过芯片筛选和验证发现，miR-200b/c/429在胆管癌和胆管癌干细胞中显著性低表达。已有研究表明miR-200b/c/429参与调节多种肿瘤干细胞的“干性”。针对以上认知，我们通过qRT-PCR和原位杂交方法进一步明确miR-200b/c/429在胆管癌干细胞中的关键亚基——miR-200b/c；构建慢病毒增强表达载体干预胆管癌干细胞，证明miR-200b/c 可抑制胆管癌细胞体内外侵袭、迁移、远处转移；可有效的增加胆管癌细胞对5-氟尿嘧啶的化疗敏感性；可以抑制胆管癌成瘤、克隆形成，并减少胆管癌细胞膜表面 CD133 的表达量；利用荧光报告素酶体系和ChIP方法检测发现miR-200b/c通过miR-200b/c-ROCK2-LIMK-Cofilin 和 ZEB1/2-E-Cadherin 通路共同影响胆管癌的侵袭转移能力，二者具有协同性，同时miR-200b/c通过SUZ12影响胆管癌干细胞效应。通过本项目研究，我们证实了miR-200b/c/429功能簇在胆管癌干细胞生物学特性中的重要调控作用，并初步阐明了作用机制，为胆管癌干细胞的分子靶向治疗提供了坚实的理论基础。