microRNA200b调控树突状细胞发育分化的分子机制研究

树突状细胞（DC）是机体免疫反应最重要的始动者，由造血干细胞分化而来的DC在不同的诱导条件下可发育成为表型和功能各异的亚群，从而调控机体的免疫反应和免疫耐受，研究DC的发育分化机制具有重要的科学意义。microRNA（miRNA）作为新近发现的调控发育分化极其重要的调节子，它主要通过对基因表达的转录后调节而发挥其调控作用，但到目前为止miRNA是如何调控DC的发育分化尚不清楚。为此，我们经计算机预测筛选了多条与DC发育分化相关的miRNA，前期实验结果发现miRNA200b在调控CD14+单核细胞向DC分化过程中起非常重要的作用，以此展开miRNA200b调控造血干细胞和循环血单核细胞向DC分化的体内外系统分子机制研究，进一步利用小鼠移植物抗宿主病模型探讨其体内调控DC作用，揭示miRNA 对DC发育分化调控的分子机制，为DC的临床应用和解决移植排斥提供有效的理论与实验依据。

由造血干细胞分化而来的树突状细胞（dendritic cell, DC）是机体免疫反应最重要的始动者，其在不同的诱导条件下可发育成为表型和功能各异的亚群，从而调控机体的免疫反应和免疫耐受，研究DC的发育分化机制具有重要的科学意义。microRNA（miR）作为新近发现的调控发育分化极其重要的调节子，它主要通过对基因表达的转录后调节而发挥其调控作用，但到目前为止miR是如何调控DC的发育分化尚不清楚。近年的研究结果显示，miR调控DC的发育分化和功能，在这个过程中miR通过上调影响其功能的发挥。那么miR下调是否影响DC的发育分化和功能？为此我们通过以往文献调研和实验研究发现，miR-15a、16 、17、19a、19b、25、26、93、106b、142-5p、199a、200b在DC的发育过程中呈现下降趋势，随着培养时间的延长，表达逐渐降低，其中以miR-200b下降最为显著。以此展开miR-200b调控外周血单核细胞向DC分化的体内外系统分子机制研究，结果表明，转染miR-200b mimic可抑制成熟DC的毛刺形成，未成熟DC（immature, iDC）吞噬能力下降明显，提示miR-200b可能阻碍了iDC的发育；对DC生物学功能影响结果显示，miR-200b可显著降低成熟DC（mature, mDC）刺激T细胞增殖的能力，且显著下调DC的迁移能力，说明miR-200b影响DC的发育分化。针对miR-200b调控DC发育分化的作用机制，根据生物信息学预测结合Q-PCR和Western blot检测，发现WASF3在DC发育过程中变化最为显著，随着DC的成熟其表达逐渐上升；将miR-200b转入mDC， WASF3表达则显著下降。荧光素酶报告基因检测结果表明，miR-200b直接作用于WASF3 3’UTR的保守靶序列。进一步验证其对DC生物学特性影响，结果显示miR-200b通过作用WASF3调控DC的免疫功能与迁移能力；且主要通过WASF3调控细胞骨架重塑达到抑制DC迁移的作用。为探讨miR-200b体内对DC发育分化的影响，我们建立了小鼠急性移植物抗宿主病模型，结果表明，选择合适的照射剂量可建立高效稳定的小鼠aGVHD模型，为今后深入研究miRNA 对DC发育分化调控的分子机制提供了可靠的理论与实验依据。上述研究结果发表学术论文5篇，培养1名硕士研究生。