miR-663在长梗秦艽酮诱导非小细胞肺癌细胞凋亡过程中的作用及其机制研究

MicroRNA (miRNA) play an important role in the development and progression of human lung cancer. While altered expression of miRNAs would be the important application for discovering effective targets and mechanisms in treatment of cancer with anticancer agents. Waltonitone was isolated from Gentiana waltonii Burkill, which has been successfully used for centuries in Chinese folk medicine. Recent studies have shown that waltonitone could inhibited growth of cultured cells in few human carcinoma cell lines. In our previous study, we found that waltonitone could inhibit the proliferation of A549 cell and induce cell apoptosis. We also found that waltonitone upregulated the expression of miR-663. MiR-663, which downregulated in many cancer, may be a target for drug treatment. To further understand the mechanisms of action of waltonitone against the growth of human lung cancer A549 cells, we investigated the role of miR-663 in it using real-time PCR, transfection, western blotting，luciferase assays and other methods. It will supply experimental basis for the further investigation of anti-cancer mechanism of waltonitone, and will provide the theoretical basis for clinical treatment of non-small cell lung cancer.

MicroRNA(miRNA)在肺癌的发生发展过程中发挥重要作用,可以成为药物治疗肺癌的作用靶标。萜类化合物具有良好的抗肿瘤作用，长梗秦艽酮是从长梗秦艽中分离得到的一个萜类化合物，国内外研究发现其有明显抗肿瘤作用。在前期研究中我们发现长梗秦艽酮对肺癌A549细胞有较强的抑制作用，可抑制细胞的增殖、诱导细胞凋亡；同时发现药物作用前后伴随miR-663表达增加，相关文献已证实miR-663作为抑癌基因在多种肿瘤中发挥作用，其可能成为肺癌药物治疗的靶标。本研究拟在前期研究的基础上，通过实时定量PCR、转染、免疫印迹、双荧光素酶报告等研究方法，进一步探明长梗秦艽酮诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制,并探讨miR-663在其中所起的调控作用。揭示长梗秦艽酮抑制非小细胞肺癌增殖与诱导细胞凋亡的作用靶标，为临床长梗秦艽酮辅助治疗非小细胞肺癌提供理论依据，为研制和开发抗肿瘤创新药物奠定基础。

近年来的研究表明，microRNA(miRNA)在肺癌的发生发展过程中发挥重要作用，可以成为药物治疗肺癌的作用靶标。我们的研究发现长梗秦艽酮对肺癌A549细胞有较强的抑制作用，可抑制细胞的增殖、诱导细胞凋亡，同时还发现了药物作用前后伴随miR-663表达增加，miR-663可能成为肺癌药物治疗的靶标。本项目用不同浓度的长梗秦艽酮作用于非小细胞肺癌细胞系；miR-663 mimic、miR-663 inhibitor 分别转染非小细胞肺癌细胞系，并使用CCK-8实验、细胞凋亡分析、实时定量PCR、Western blot等实验方法，进一步证实了长梗秦艽酮可以促进miR-663表达，进而下调Bcl-2表达诱导细胞凋亡。长梗秦艽酮诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的作用部分是通过miR-663—Bcl-2来实现的。本项目还进一步分析了miR-663a在人类非小细胞肺癌组织中的表达以及与临床病理特征的相关性，并探究了miR-663a的生物学行为以及潜在的分子作用机制。通过细胞培养、细胞转染、实时定量PCR、Western blot、集落形成实验、流式细胞术、基质胶侵袭实验、荧光素报告实验等实验方法，进一步证实了在人类非小细胞肺癌中miR-663a表达下调，并且miR-663a的表达与人类非小细胞肺癌的发生发展密切相关。miR-663a作用的靶基因为AP-1组分JunD，并以此抑制肿瘤细胞的增值和侵袭。本课题明确了miR-663在长梗秦艽酮对非小细胞肺癌抑制作用中的具体作用机制，为抗肿瘤药物的机制研究提供了新的思路和方法。