SPHK1/S1P信号通路活化在乳腺导管上皮细胞增殖失控中的作用及机制研究

乳腺导管上皮细胞过度增殖继而发生恶性转化是乳腺癌发生的关键环节，但其机制迄今尚未明确。我们前期研究发现鞘氨醇激酶（Sphk）1及cyclinD1在正常乳腺组织、不典型增生及乳腺癌中共表达，表达依次增强，并且有显著相关性，基于Sphk1及cyclinD1均在细胞增殖中发挥重要作用，且Sphk1/S1P通路对细胞周期有重要影响，推测Sphk1可能通过上调cyclinD1表达调控细胞增殖，促进乳腺上皮细胞发生恶性转化。本研究通过诱导乳腺上皮细胞恶性转化，基因转染Sphk1导入乳腺上皮细胞，观察Sphk1 通路在细胞恶性增殖中的作用，明确Sphk1活化后是否通过上调cyclinD1表达刺激细胞增殖，并证实NF-κBp65作为核转录因子受到Sphk1活化后启动cylin D1基因转录，调控cyclinD1表达，探讨乳腺导管上皮细胞增殖失控的分子机制，为阐明乳腺癌发生的机理、寻找针对性措施提供依据。

乳腺导管上皮细胞过度增殖继而发生恶性转化是乳腺癌发生的关键环节，在本研究中，利用DMBA（二甲基苯蒽）能够诱导乳腺导管上皮细胞MCF-10A发生恶性转化，诱导细胞裸鼠皮下移植后能够成瘤，DMS抑制SPHK1表达后细胞恶性转化能力减弱。研究发现抑制SPHK1表达后，诱导细胞增殖能力、侵袭能力及细胞克隆形成均减弱，不能在裸鼠皮下成瘤。基因转染Sphk1导入乳腺导管上皮细胞后发现，细胞增殖能力、侵袭能力均明显增加，而RNA干扰或DMS抑制SPHK1表达后细胞增殖及侵袭能力减弱。同时TNF-α能够激活SPHK1表达，SPHK1表达激活后细胞增殖及侵袭力增加，抑制SPHK1表达后细胞增殖及侵袭减弱。同时在乳腺癌MCF-7细胞中，RNA干扰抑制SPHK1表达后发现细胞增殖、侵袭减弱。而在151例乳腺癌临床病理研究中也发现，Sphk1在乳腺浸润性癌中的表达水平显著高于纤维腺瘤，Sphk1高表达与乳腺癌恶性程度高及淋巴结转移有关，提示其也可能参与了乳腺癌的进展。TNF-α激活MCF-10A细胞SPHK1表达后，NF-κB p65和CyclinD1蛋白表达显著增加。SPHK1活化后，抑制cyclinD1表达后细胞增殖及侵袭能力减弱，证实Sphk1活化后通过上调cyclinD1表达刺激细胞增殖，并证实NF-κBp65作为核转录因子受到Sphk1活化后启动cylin D1基因转录，调控cyclinD1表达。通过本研究深基本阐明Sphk1信号通路作用机制及其在乳腺导管上皮细胞恶性转化中可能发生的作用，以及在乳腺癌进展中也发生重要作用。通过本研究相关工作，在国内核心期刊发现论著1篇，在国外SCI杂专发现论著2篇，培养博士研究生、硕士研究生各1名。