高亲和性肿瘤特异性T细胞受体的鉴定和应用

肿瘤特异性过继细胞免疫治疗是目前疗效最肯定的肿瘤生物治疗手段，由于肿瘤特异性T细胞的获得很困难，使得该方法比较难以在多数病人中进行。T细胞的特异性是由T细胞受体（TCR）所决定的，用基因转染技术把克隆的肿瘤特异性TCR导入病人自身的或正常人的T细胞中，使这些正常T细胞因携带特异性TCR成为肿瘤特异性的T细胞,并具有靶向特异性的识别并清除肿瘤细胞的功能。这种技术克服了特异性T细胞来源不足的问题，可以体外产生大量的肿瘤特异性T细胞。本项目应用分子生物学和免疫学相结合的技术，筛选出具有较强抗肿瘤能力的肿瘤特异性T细胞并从中克隆出TCR，通过在体外对T细胞克隆以及对TCR转导T细胞的功能分析，确定TCR的亲和性；在动物实验中验证TCR转导的T细胞的抗肿瘤功能，并探讨TCR转导CD4+T细胞对TCR转导CD8+T细胞功能的影响，最终选择具有较高抗肿瘤能力的TCR,用于肿瘤的生物治疗。

根据标书和在项目开展过程中发现的新问题，我们首先对癌睾抗原家族的多个基因的表达进行了分析，我们发现癌睾抗原家族的MAGE-A3和MAGE-C2 高表达在我国肺癌病人的肿瘤组织中，结合HLA-A2在我国人群中的表达，癌睾抗原家族的这些基因可以作为肺癌免疫治疗的靶基因；同时我们发现，这些癌睾抗原家族的基因在肺癌中的表达和患者的临床参数关系密切，这些基因的检测可以作为肺癌患者的预后参考指标；我们建立了一种新的肿瘤浸润淋巴细胞功能评价的分析方法，检测了肺癌患者肿瘤组织中浸润淋巴细胞的功能以及分析这些淋巴细胞的频度与病人的预后关系中；同时我们分析了这些病人肿瘤浸润淋巴细胞的TCR分布，发现了TCR分布和病人的临床关系密切；我们克隆了MAGE-A3和MAGE-C2的一些克隆，对这些克隆的亲和性进行了分析，由于进口试剂购买环节的问题，刚刚开始克隆这些T细胞克隆的TCR，将于今年年底前完成所有的标书规定的研究方向，并利用该资助，深入研究了与肿瘤微环境中抗原特异性细胞功能和频度的影响因素，为将来的TCR转染T细胞在肿瘤微环境的生理学改变的基础研究和临床应用提供了依据。考虑到食管癌是研究者所在地区高发的癌症，我们在整个研究中同时也对食管癌以及肝癌也进行了同样的分析。