标本配穴针刺防治慢性心肌缺血的效应及其代谢识别模式研究

Based on the close relation between ischemic myocardial diseases and metabolic process and our previous work, we hypothesize that the metabolic substance spectrum may be the biological basis to evaluate the effectiveness of acupoints combination.Chronic myocardial ischemia model of rats will be established.Combined biao and ben points, compared with single point acupuncture, with far and near coordination of acupoints will be applied to observe the effect of acupuncture point on myocardial ischemia.From the overall metabolic flow, we will use the metabonomics testing technology (high performance liquid chromatography-mass spectrometry LC-MS/MS and nuclear magnetic resonance 1H NMR respectively to test, complementary strengths, testing analysis) and pattern recognition method, so as to analyzes the change rule of metabolic products and the metabolic pathways of the acupoints compatibility effects.Particulary, SIRT1-activated mitochondrial oxidatie metabolic pathway will be studies by fluorescent element enzyme gene technology, method of co-immunoprecipitation，western blotting, real-time quantitative RT-PCR and Clark oxygen electrodes system. The research is going to disclose the synergetic effect of combined biao and ben acupoints on PC6's anti-myocardial ischemia injury and the involved energy metabolism mechanism, to establish metabolic recoginition model to evaluate the validity and feasibility of biao-ben acupoints combination.The results of the research will provide proof for acupoint combination in clinical practice.

基于缺血性心脏病与体内代谢过程密切相关的特点，在前期工作的基础上，提出代谢物质谱可作为评价穴位配伍有效性的生物学基础，拟以慢性心肌缺血模型大鼠为研究对象，选用标本配穴，以单穴针刺、远近配穴为对照，观测标本配穴对心肌缺血的效应，从整体代谢流的角度，采用代谢组学检测技术(高效液相色谱-质谱联用LC-MS\MS和核磁共振1H NMR分别检测，优势互补，对比分析)和模式识别方法，分析代谢产物的变化规律和参与穴位配伍效应的代谢途径，特别从SIRT1激活的线粒体氧化代谢途径为切入点，运用荧光素酶报告基因技术、免疫共沉淀法、western blotting以及实时定量RT-PCR等实验方法，并借助Clark氧电极系统，研究标本配穴对内关抗心肌缺血损伤效应的增强作用及能量代谢机制，有望建立评价标本配穴可行性和有效性的代谢识别模式，为临床穴位配伍提供规范和理论基础。

基于缺血性心脏病与体内代谢过程密切相关的特点，在前期工作的基础上，提出代谢物质谱可作为评价穴位配伍有效性的生物学基础，拟以慢性心肌缺血模型大鼠为研究对象，选用“标本配穴”针刺，以单穴针刺、远近配穴针刺为对照，观测“标本配穴”对心肌缺血的效应，从整体代谢流的角度，采用代谢组学检测技术(高效液相色谱-质谱联用LC-MS\MS和核磁共振1H NMR分别检测，优势互补，对比分析)和模式识别方法，分析代谢产物的变化规律和参与穴位配伍效应的代谢途径，特别从SIRT1激活的线粒体氧化代谢途径为切入点，运用荧光素酶报告基因技术、免疫共沉淀法、western blotting以及实时定量RT-PCR等实验方法，并借助Clark氧电极系统，研究“标本配穴”对内关抗心肌缺血损伤效应的增强作用及能量代谢机制。结果表明，电针能有效防治心肌缺血，“标本配穴”法电针的治疗作用优于常规配穴法电针。“标本配穴”法电针抗心肌缺血损伤的作用机制可能是通过激活抗氧化酶，抑制大量氧自由基释放途径，减轻心肌mtDNA氧化损伤，提高心肌细胞抗氧化损伤能力；同时通过上调内源性SIRT1途径，激活其下游 PGC-1α/NRF-1/mtTFA信号通路，稳定心肌mtDNA，减轻心肌线粒体功能损伤。“标本配穴”针刺组与慢性心肌缺血组相比，代谢轮廓区分明显，血清代谢中有着特异的特征，乳酸含量显著增加，葡萄糖，丙氨酸，脯氨酸，丙酮酸含量显著降低。尿液代谢中有着特异的特征，乙酰乙酸、奥昔嘌醇含量显著升高，牛磺酸、葡萄糖醛酸、辛酸、马尿酸、N-乙酰谷氨酸、壬二酸、4-羟基苯乙酸、顺式乌头酸、二甲胺、甘氨酰脯氨酸含量显著下降。血清与尿液代谢中产生的以上代谢产物与能量代谢、脂代谢、糖代谢、氨基酸代谢相关，说明“标本配穴”针刺治疗慢性心肌缺血是通过改善这些产物的含量来调节相关代谢紊乱实现的，这些代谢产物有望成为慢性心肌缺血临床预防、诊疗与评估疾病转归重要相关的代谢标志物，为临床穴位配伍提供规范和理论基础。