基于 “TLRs 信号通路”对针刺不同配穴防治应激性胃溃疡的“平衡重构”机制研究

More than 85% of intensive care patients have stress gastric ulcer,and oxidative damage is the critical segment of it.Compensatory ischemia of gastric mucosa under stress can lead to inflammatory erosion of gastric mucosa,produce amount of free radicals and destroy the balance between oxidation and antioxidation.The research group find it has special effects on stress gastric ulcer in the way of needling Zusanli(ST36) and Zhongwan(RN12) which is combination of front-mu and lower he-sea points.And this method has regulatory effect on differently expressed protein ,which is involved in oxidative stress reaction.According to the report that TLRs signal path is the main factor of ischemia induced inflammation,a hypothesis proposed:matching front-mu and lower he-sea points acupuncture is against oxidative damage of gastric mucosa effectively in stress gastric ulcer,promoting the balance reconstruction of oxidation antioxidation through TLRs signal path.We analyze the changes of rats' serum with stress gastric ulcer after matching front-mu and lower he-sea points acupuncture,marker protein expression in gastric tissue such as TLR-2、TLR-4、MyD88,and the activity of TNF-a、SOD、H+-K+-ATPase in gastric mucosa by using the technology of enzyme linked immunosorbent assay、western blot、real - time fluorescence quota PCR,in order to clarify the molecular mechanism of balance reconstruction how to prevent and treat stress gastric ulcer by acupuncturing with different matching acupoints.It will provide a new method of study on the mechanism of acupuncture and moxibustion in the prevention and treatment of stress gastric ulcer.

超过85%的重症监护患者发生应激性胃溃疡，氧化损伤是其发生的关键环节。应激状态下胃粘膜的代偿性缺血导致胃粘膜炎性糜烂和大量自由基产生，引起氧化-抗氧化平衡破坏。课题组发现针刺胃经中脘穴加足三里的“合募配穴法”对应激性胃溃疡有特异性作用，且合募配穴对参与氧化应激反应的差异表达蛋白有调节作用，结合TLRs 信号通路是缺血诱导性炎症主要因素的报道，提出假说：合募配穴针刺能有效对抗应激性胃溃疡胃粘膜的氧化损伤，并通过TLRs信号通路促进“氧化-抗氧化”的平衡重构。为了明确针刺不同配穴防治应激性胃溃疡的“平衡重构”分子机制，拟采用酶联免疫、蛋白质印迹和实时荧光定量PCR等技术分析合募配穴针刺干预应激性胃溃疡大鼠后血清和胃组织中TLR-2、TLR-4、MyD88等标志蛋白表达变化，以及胃粘膜中TNF-a，SOD、H+-K+-ATPase等活性的改变，为针灸防治应激性胃溃疡的机理研究提供新的思路和方法。

应激（stress）是机体受到强烈刺激后所造成的瞬间反应，可以使体内稳定状态被破坏出现细胞代谢障碍和损伤。随着社会压力的增加，应激性胃溃疡（SGU）已逐渐成为临床常见病。 .目前对于SGU的发病机制尚不明确，且无特效治疗药，而针灸疗法对SGU具有良好的治疗作用。科学合理的配伍是使针灸具有较高疗效的关键所在。基于课题组前期归纳整理出胃腑证的取穴规律和特点，发现采用合募配穴（足三里配中脘）和俞募配穴（胃俞配中脘）治疗胃腑疾病远远高于其他配穴方法，且临床效果较优。.课题组前期理论研究发现，SGU的发病机制主要为胃内“氧化-抗氧化”的平衡被破坏，过量的自由基引起胃黏膜或黏膜细胞的脂质过氧化损伤，导致溃疡发生。TLRs信号通路被认为是先天免疫和缺血诱导性炎症的主要因素。因此，课题组基于TLRs信号通路，从针刺不同配穴可重构“氧化-抗氧化”平衡状态角度开展针刺治疗SGU的机制研究工作。.为阐述具体作用机制，课题组采用水浸束缚法建立SGU大鼠动物模型，观察预针刺不同配穴对胃黏膜溃疡指数与组织形态变化的影响，检测胃组织中SOD、MDA等氧化-抗氧化因子，IL-1β、IL-6等炎性因子，MyD88、TLR4、IκB-α等蛋白的表达，分析基于TLRs信号通路对针刺不同配穴防治SGU的“平衡重构”机制。结果证实，预针刺可以改善SGU大鼠的胃黏膜受损情况，降低炎症因子水平，促进抗氧化因子形成。其中合募配穴抗氧化能力更强，俞募配穴抗炎作用更强。这可能是“平衡重构”的重要起始步骤之一。预针刺对SGU大鼠黏膜组织的保护作用可能是通过TLRs信号通路转导实现的。合募配穴可能通过抑制TLR1/TLR4/MyD88/TRIF/IκB-α通路而发挥作用，俞募配穴可能通过抑制TLR4/TLR5/MyD88/TRIF/IκB-α通路而发挥作用，其不同点可能在于TLR1、TLR5、MyD88蛋白上。这可能是“平衡重构”的中心环节之一。.通过本次研究，初步揭示了针刺防治SGU的平衡重构机制及治疗作用。本项目的研究结果，为临床采用针灸疗法防治SGU提供了可靠的、高质量的实验依据，证明针灸可作为防治SGU的主要手段，有助于提高SGU的预防及临床治疗水平，提高SGU患者的生活质量。