Importin13:一个新的干细胞标志物及其对眼表上皮干细胞增殖与分化的调控

本项目拟采用免疫化学、分子生物学等研究方法和干细胞克隆培养技术探讨一个在细胞生物学领域新近发现的核质转运受体蛋白- - -importin13作为一个新的眼表上皮干细胞阳性标志物的可能性与可行性。并采用靶向importin13的siRNA技术作用于克隆培养的眼表上皮干细胞，探讨importin13表达沉默后，克隆培养的眼表上皮干细胞表型、增殖和分化能力的改变。本项目将原创性地为眼表上皮干细胞的识别与鉴定、分离与培养提供一个直接的、具有特异性的崭新标志物与方法；并进一步探讨importin13作为一个新的干细胞标志物，在维持眼表上皮干细胞表型与功能所起到的重要调控作用；从而为提高眼表上皮干细胞移植成功率和促进干细胞组织工程研究发展具有全新、重要而深远的意义。

【背景】正常干细胞相关标志物的发现为肿瘤发生机制的研究及寻找特异性的肿瘤干细胞标志物提供了新的思路，importinl3(IP013)是新发现的IPO B家族的成员，是该家族中唯一具有细胞核和细胞质双向转运功能的蛋白，其在眼部及角膜缘肿瘤组织中生物学特性的研究甚少。【目的】研究细胞核及细胞质双向转运受体蛋白IP013在人角膜缘肿瘤中的表达，并与角膜缘干细胞标志物p63的表达进行比较，探讨两者在人角膜缘肿瘤中的表达差异及意义。【方法】收集正常人供体眼球角膜缘处的结膜及角膜缘组织、角膜结膜乳头状瘤(CCP)和角膜结膜上皮内上皮癌(CCIN)组织标本各6例，采用冰冻切片免疫组织化学染色法检测相应组织中IP013、p63的表达量(A值)。采用单因素方差分析法和SNK—q检验进行统计学比较。【结果】IP013主要表达于人正常眼球结膜、角膜缘上皮基底细胞的细胞核内，表达于CCP、CCIN组织上皮基底细胞和基底上层细胞的细胞核内，呈棕褐色颗粒。IP013蛋白在正常角膜结膜、CCP、CCIN组织中的表达量(A值)分别为1687±1014、3546+1375和7635±2854，总体差异有统计学意义(F=7．23，P<0．05)，其中CCP、CCIN组织中的表达量明显高于正常角膜结膜组织，差异均有统计学意义(q=4．02、5．13，P<0．05)；CCIN组织中的表达量明显高于CCP组织，差异有统计学意义(q=3．45，P<0．05)。p63在正常人眼球结膜、角膜缘、CCP组织上皮基底细胞和基底上层细胞的细胞核内及CCIN组织上皮全层的细胞核内均有表达。p63在正常角膜结膜组织中、CCP、CCIN组织中的表达量分别为2110±1229、3966±2129和6650±2136，差异有统计学意义(F=6．17，P<0．05)，其中CCP、CCIN标本中阳性表达的A值均明显高于正常角膜结膜标本(q=4.12、5.33，P<0．05)，CCIN标本中阳性表达的A值明显高于CCP标本，差异有统计学意义(q=3．83，JP<0．05)。【结论】IP013在角膜缘上皮增生性病变中的低分化细胞中作为标志物较p63更具特异性。与正常角膜结膜组织相比，IP013与p63，CCP、CCIN组织中的表达逐步上调，可能在角膜结膜增生性病变中起到正性调控作用。