口腔黏膜下纤维性变癌变机制中重要靶标蛋白的筛选和功能研究

口腔黏膜下纤维性变（oral submucous fibrosis，OSF）是一种累及全口黏膜且有较高癌变潜能的特殊黏膜病变。由于缺乏早期预警和监测OSF癌变的靶标分子，其癌变的晚期患者数量逐年增多且预后相对较差，筛查OSF癌变相关的重要靶标分子是急待研究的课题。本项目在前期工作基础上，继续采用基于多维纳升级反相液相色谱-质谱联用策略的氧稳定同位素标记法定量蛋白质组学技术，完成鉴定OSF组织和OSF癌变组织间的全部差异蛋白（前期工作已鉴定了其中49种差异蛋白），再通过MetaCore生物信息学软件筛选出重要靶标蛋白并进行验证；最后在细胞水平的功能实验中，研究不同浓度槟榔提取物的刺激对高表达靶标基因的黏膜上皮细胞以及沉默表达靶标基因的OSF癌变细胞系增殖、凋亡能力的影响，从而为阐明OSF癌变机制提供新见解，为早期预警OSF癌变提供新靶标，为延缓或逆转OSF癌变病程的药物及基因治疗提供新策略。

摘要：课题通过iTRAQ定量蛋白质组学技术，对比了OSF颊粘膜和对应的OSF癌变组织差异蛋白，共发现91种差异蛋白；其中上调蛋白（即癌变组织中的表达显著高于OSF组织）为52种，差异倍数最大的前三种蛋白为：羧酸酯酶1(CES1)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶2（HMGCS2）、醛脱氢酶9A1 (ALDH9A1)；下调蛋白（即癌变组织中的表达显著低于OSF组织）有39种，差异倍数最小的前三种蛋白为：人微纤丝相关蛋白4（MFAP4）、组蛋白H4系列、APCS蛋白。通过生物信息学分析，Protein binding是差异蛋白主要的蛋白功能、Oxidation reduction是主要的差异生物过程、差异蛋白主要定位于细胞胞浆中、羟酰辅酶A脱氢酶（hydroxyacyl-CoA dehydrogenase，HADHA）涉及的细胞信号通路最多、Systemic lupus erythematosus和Nucleosome assembly以及Betaoxidation Pathway是在OSF癌变过程中最主要的信号通路。HADHA在OSF癌变组织中基因和蛋白表达水平明显高于OSF组织，并且与OSF癌变患者的淋巴转移和临床分期有关。同时，HADHA阳性OSF癌变患者5年生存率较HADHA阴性者低、预后差，HADHA可以作为评估OSF癌变患者预后标志物。我们认为OSF癌变过程主要与细胞免疫功能、细胞能量代谢过程、氧化还原过程有着重要联系，其中脂肪酸代谢过程中的重要催化酶HADHA是OSF癌变的重要诊断以及预后标志物。