穴位贴敷疗法通过TRPV1抑制神经-炎症环路防治哮喘的机制研究

While with no consensual understanding of mechanism, acupoint herbal patching（HAP） works effectively against asthma in cinical application. This study will take "baijiezitufa" as a representative of HAP and explain mechanism of HAP by experimenting on animal and cell with time sequence laser confocal, protein co- colocalization and method of researching mechanism with curative effect，that HAP may work by modulating neuroimmunoendocrine. （1） This subject will ensure that the components of semen brassicae(CSB) effect on DRG through TRPV1 by stimulating DRG with CBS and detecting cell excitability, Ion concentration of Ca2+ , and the distribution of neuropeptide.（3）This study will ensure that HAP could inhibit neuro-inflammation crosstalk through stimulating TRPV1 on nociceptor neuron fiber modulating distribution of neuropeptide between fibers from same nerve segment, reducing nerve oversensitation, by comparing the asthma related indexes, content of neuropeptide between TRPV1+/- after HAP treatment. At last, this research will analyze if there is other related nociceptors and neurotrophic factors involved with PCR-Array. This study will provide information of inner relationship between acupoint and asthma.

穴位贴敷疗法对哮喘有着良好的疗效，但内在过程及机理尚不十分清楚。本项目拟采用白芥子涂法为代表，在细胞与整体中通过以效证机、单轴突刺激、时间序列激光共聚焦、蛋白共定位等方法，对穴位贴敷治疗哮喘的机制进行研究。（1）通过检测受药物刺激后DRG细胞的细胞兴奋性、钙离子浓度、神经肽分布与释放，确定白芥子主要成分通过TRPV1刺激影响DRG功能；（2）对OVA致过敏性哮喘模型的正常/TRPV1穴位阻断动物进行穴位贴敷，测定哮喘系列指标、神经肽组织间含量分布，确定穴位贴敷能够通过穴位皮下伤害感受性神经纤维上的TRPV1，调节神经肽分布，降低神经超敏，从而抑制同节段支配的肺内感受性纤维通过轴突反射形成神经-炎症环路，阻止哮喘的发生发展；（3）进一步通过相关通路PCR-Array，分析是否有其他感受器和神经因子参与此过程，明确穴位贴敷治疗哮喘的内在机制。研究结果为穴位-脏腑内在联系提供理论依据。

穴位贴敷疗法对哮喘有着良好的疗效，但内在过程及机理尚不十分清楚。本项目拟采用白芥子涂法为代表，在细胞与整体中通过以效证机、单轴突刺激、时间序列激光共聚焦、蛋白共定位等方法，对穴位贴敷治疗哮喘的机制进行研究。（1）通过检测受药物刺激后DRG细胞的细胞兴奋性、钙离子浓度、神经肽分布与释放，确定白芥子主要成分通过TRPV1刺激影响DRG功能；（2）对OVA致过敏性哮喘模型的正常/TRPV1穴位阻断动物进行穴位贴敷，测定哮喘系列指标、神经肽组织间含量分布，确定穴位贴敷能够通过穴位皮下伤害感受性神经纤维上的TRPV1，调节神经肽分布，降低神经超敏，从而抑制同节段支配的肺内感受性纤维通过轴突反射形成神经-炎症环路，阻止哮喘的发生发展；（3）进一步通过相关通路PCR-Array，分析是否有其他感受器和神经因子参与此过程，明确穴位贴敷治疗哮喘的内在机制。研究结果为穴位-脏腑内在联系提供理论依据。.通过上述实验，基本确定伏九贴敷可调节过敏性哮喘动物神经和穴位皮肤的TRPV1表达，并对穴位-肺脏之间的神经炎性因子分布起到调控作用，当应用TRPV1拮抗剂时，此调控作用减弱，。在细胞实验中，ELISA实验显示，拮抗TRPV1对辣椒素或白芥子、细辛有效成分诱导的DGR细胞神经肽分泌量具有一定的调控作用。本研究采用辣椒平代替了QX-314。发现在穴位贴敷的豚鼠和小鼠的肺组织、BALF和穴位皮肤及DRG神经中，神经肽含量和分布均发生了变化，在辣椒碱穴位拮抗组，气道敏感性调节作用不如普通贴敷组，神经肽的分布也有较大变化，提示其为通过穴位TRPV1刺激起到相关调控作用。但辣椒素和辣椒平穴位注射组并不能起到与穴位贴敷完全一致的效果，可见其调控具有复杂性。.执行期内，发表中文核心期刊论文两篇，培养博士研究生一名。