磷脂膜修饰微乳色谱高通量构建中药生物指纹图谱的研究

本课题在研究微乳液相色谱测定不同类型中性和碱性药物的油-水分配系数（log P）的方法、以及测定丹参药材中的全溶解性成分的指纹图谱的基础上，进一步应用微乳液相色谱法以丹参药材和复方丹参片的全溶解性成分为药物模型, 制备稳定的磷脂混合微乳，用磷脂膜修饰的微乳液相-整体柱梯度色谱法,以中药标准物质的log P与log k的线性拟合方程，预测全谱指纹峰的log P。结合Caco-2细胞模型，测定标准物质和中药提取物的全谱指纹成分随时间变化的累积渗透量，计算其表观渗透系数Papp(E)，建立标准物质log P与logPapp(E)模拟线性关系，以此计算中药全谱指纹成分的logPapp(C)。通过Caco-2细胞模型药物透膜的研究，揭示中药全谱指纹成分生物色谱的分配系数与其表观渗透系数的相关性,建立以磷脂膜修饰微乳液相色谱测定中药生物指纹图谱作为中药组成分有效性和生物利用性的高通量筛选平台。

本课题研究微乳液相色谱法（MELC）测定中性、酸性、碱性以及两性药物的油-水分配系数（log P），应用线性溶剂化参数方程比较多种生物色谱体系，得到预测药物脂溶性的最优体系；研究了混合微乳体系：十二烷基磺酸钠（SDS） -磷脂酰胆碱（PC）的10个不同组成的微乳色谱的预测能力，在logk-logP相关性较优的色谱条件下引入磷脂酰胆碱（PC）作为膜修饰模型。PC-SDS微乳液相色谱体系用线性溶剂化能方程（LSER）描述，并通过欧氏距离和主成分分析（PCA）评价该体系与正辛醇/水系统和其他体系的相似性。所建立的模型用已知logP药物验证其可靠性。建立PC-SDS修饰柱，比较该体系logk-logP和logk-logD相关性差异，该体系与其它磷脂膜修饰色谱进行PCA分析，对于中性和离子型化合物logk-logD具有较好的相关性（R2=0.8），建立了中性和离子型药物进行高通量脂溶性筛选模型。研究了平行人工膜通透性分析与微乳色谱保留的相关性，将支持向量集和反向传播神经网络应用于相应的最佳微乳体系，得到的保留因子与药物的渗透性有较好的相关性，表明微乳液相色谱可代替平行人工膜通透性分析高通量测定药物的渗透性和生物过程。.在上述研究的基础上，采用微乳液相色谱法对丹参药材中的9种全溶解性成分进行分离优化，达到最佳分离色谱条件，选择26种微乳体系建立高通量筛选药物脂溶性模型，比较微乳体系之间的聚类分析和溶剂化参数，以及和体系的欧式距离，建立了最佳微乳体系，实验值与预测值相关性较好，证实了所建平台的可靠性，并对丹参药材的未知成分进行了预测。.通过HPLC测定大鼠血浆中五种丹参有效成分丹参素钠、迷迭香酸和丹酚酸 B隐丹参酮和丹参酮ⅡA，并研究丹参水溶性及脂溶性提取物在大鼠体内的药动学特征。建立了定量保留-药动学相关性（QRPR）,评估了优化的微乳体系，采用支持向量集模型与优化的微乳体系相关，经过统计学验证，证明了微乳体系保留因子与药动学参数具有较好的相关性。揭示中药全谱指纹成分的通透性与其药动学参数的相关性,建立中药生物指纹图谱作为中药组成分有效性和生物利用性的快速筛选平台。由于Caco-2细胞渗透性试验对于丹参水溶性成分的渗透性线性较差，本研究改用平行人工膜和大鼠定量保留-药动学相关性（QRPR）试验，揭示中药全谱指纹成分的通透性与其药动学参数的具有良好的相关性。