基于Wnt/β-catenin信号通路养营活血汤从营虚血瘀论治肝纤维化机制研究

Hepatic fibrosis (HF) is a chronic, progressive, diffuse liver disease, stellate cells (HSC) played a key role in the formation of HF, the variety of causes cell activation and damage, by Wnt / β -catenin signaling pathway allows the signal to be transmitted fibrosis, activated HSC, epithelial happen - interstitial transformation (EMT), promoting fibrosis Wnt / β-catenin which is likely to promote cell through the HSC EMT achieved. Camp virtual blood stasis is the main pathogenesis of HF, Yangying Huoxue decoction can inhibit liver fibrosis, intervention Wnt / β-catenin signaling pathway may be induced EMT yangying Decoction main mechanism of HF. In this paper yangying Huoxue decoction liver fibrosis in rats and TGF-β-induced HSC-T6 cells EMT, research Yangying Huoxue decoction delaying the development of HF camp imaginary blood stasis theory and Wnt / β-catenin signaling pathway TGF-β , α-SMA, Vimentin, E-cadherin etc.The mechanism of action of regulating gene mRNA and protein expression and EMT, reveal the mechanism of prevention of HF, HF TCM rich connotation, expand HF treatment ideas prevention.

肝纤维化（HF）是一种慢性、进行性、弥漫性的肝脏病变，星状细胞（HSC）在HF的形成过程中发挥了关键作用，多种原因导致细胞活化和损伤，通过Wnt/β-catenin信号通路使纤维化信号得以传递，激活HSC，发生上皮-间质转化（EMT），Wnt/β-catenin的促纤维化作用很可能是通过其促进细胞向HSC的EMT实现的。营虚血瘀是HF主要病机之一，养营活血汤可有效抑制肝纤维化进程，干预Wnt/β-catenin信号通路所致EMT可能是养营活血汤治疗HF的主要机制。本课题以养营活血汤干预大鼠肝纤维化模型及TGF-β诱导HSC-T6细胞EMT，研究养营活血汤延缓HF发展中营虚血瘀理论与Wnt/β-catenin信号通路TGF-β、α-SMA、Vimentin、E-cadherin等基因mRNA和蛋白表达调控的作用机制及EMT，揭示其防治HF的作用机制，丰富HF中医病机内涵，拓展防治HF的思路。

肝纤维化（HF）是一种慢性、进行性、弥漫性的肝脏病变，本研究项目紧紧抓住星状细胞（HSC）这一关键因子，针对Wnt/β-catenin信号通路在肝纤维化信号传导中的作用，提出养营活血汤有效抑制肝纤维化进程，是由于干预Wnt/β-catenin信号通路促进HSC发生上皮-间质转化（EMT）实现的。本课题以养营活血汤干预大鼠肝纤维化模型及TGF-β诱导HSC-T6细胞EMT，研究养营活血汤延缓HF发展中营虚血瘀理论与Wnt/β-catenin信号通路TGF-β、α-SMA、Vimentin、E-cadherin等基因mRNA和蛋白表达调控的作用机制及EMT，揭示其防治HF的作用机制。研究取得了阶段性成果，体内研究结果：与模型组比较，养营活血汤治疗组对改善大鼠精神状态，增加食欲和体重等方面有明显改善；HE染色显示大鼠肝脏假小叶的数量减少，且胶原纤维的数量减少、变细；Masson染色显示胶原面积小于模型对照组，且假小叶的数量明显减少；血清中的ALT、AST、PCIII、IV-C、LN和HA的水平明显降低；RT-PCR检测大鼠肝组织中E-cadherin的mRNA表达水平显著升高，Vimentin与β-catenin的mRNA表达水平显著降低；Western Blot检测大鼠肝组织Vimentin和β-catenin蛋白表达水平较模型对照组显著降低、E-cadherin蛋白表达水平显著提高。体外研究结果：通过CCK8法摸出5ng/ml的TGF-β1是HSC-T6细胞增殖活化的最佳诱导浓度，干预后的HSC-T6细胞形态呈现拉伸状态，伪足增多呈星形样改变，细胞与细胞间的连接明显变得疏松，呈显著的活化状态，同时可见细胞数目明显增多；与模型组比较，养营活血汤含药血清组细胞的存活率均显著降低，Western Blot结果显示养营活血汤含药血清能降低Vimentin、α-SMA和β-catenin蛋白的表达、升高E-cadherin蛋白的表达，对TGF-β1诱导HSC-T6细胞纤维化进程中的EMT有抑制作用。整个研究结果验证了肝纤维化营虚血瘀的病机假说，不仅从分子细胞层面揭示了养营活血汤抗肝纤维化的作用机制，而且对于丰富肝纤维化的中医病机内涵及中医治法，拓展防治肝纤维化的治疗思路，具有一定的理论意义和应用价值。