基于Wnt/β-catenin信号途径探讨清热祛湿活血法抗肝纤维化机制

肝纤维化是多种慢性肝病发展成为肝硬化所必经的一个病理过程，传统的肝纤维化中医治疗大多以化瘀和（或）扶正立法，忽略了湿热等重要病理因素在肝纤维化形成和加重过程中的作用地位。本项目针对慢性肝炎很多已存在肝纤维化的事实并依据其病机以清热祛湿活血法通过体内、体外两个途径分别对肝纤维化大鼠、肝星状细胞(HSC)的干预，以新近发现的在肝纤维过程中发挥着重要作用的Wnt/β-catenin信号通路为切入点，采用实时荧光定量PCR、免疫组化、Westernblot等技术探讨清热祛湿活血法抗肝纤维化的分子机制，为中医药防治肝纤维化提供新的理论基础和治疗靶点。

肝纤维化是多种慢性肝病发展成为肝硬化所必经的一个病理过程，由于其难治性向肝癌转变的高发生率，肝纤维化治疗成为当前研究的热点。总结近年来中医抗肝纤维化的研究发现，现有复方及治法大多以活血化瘀或扶正化瘀为主，实际上我国大量的慢性乙型肝炎患者及部分病毒携带者已不同程度的存在肝纤维化，而这些患者除了“瘀”，“湿热”更是常见。我们在前期研究中证实以清热祛湿活血立法的茵芍散对大鼠肝纤维化有一定逆转作用。Wnt/β-catenin信号通路是新近发现的在肝纤维过程中发挥着重要作用的一个信号通路，与传统TGF-β1/smad信号通路相互影响。本项目以清热祛湿活血立法的茵芍散分别对肝纤维化大鼠、肝星状细胞的干预，探讨该法对Wnt/β-catenin信号通路达的影响以及β-catenin在TGF-β1介导的HSC活化过程中的作用。.对成年♂Wistar大鼠的研究结果显示，经过造模及中药、秋水仙碱灌胃干预后，中药中、高剂量组大鼠血清Ⅳ型胶原蛋白、HA、Ⅲ型前胶原、氨基末端肽等肝纤维化四项血清指标情况较造模组、秋水仙碱组好转；通过HE染色和Masson染色观察到给予中药干预后大鼠肝细胞空泡样变性减轻，胶原纤维的沉积和纤维组织增生减少，研究证实加味茵芍散在减轻肝纤维化的程度上效果优于秋水仙碱。另外在给予中药灌胃的大鼠肝脏组织内TGF-β1、β-catenin在mRNA和蛋白质表达水平上均低于造模组和秋水仙碱组( P <0.01)。.进一步的研究分别用不同剂量的茵芍散含药血清干预大鼠肝星状细胞，研究结果显示：茵芍散含药血清能阻滞HSC于DNA静止期/合成前期（G0/G1期），抑制HSC增殖并促使其凋亡，且在高剂量的浓度下促凋亡和抑制DNA合成与复制的效果最为显著(P<0.05)。同时，中药组TGF-β1、β-catenin的mRNA和蛋白表达较空白组、阴性对照组明显减弱，随着药物浓度的增加，β-catenin的下调更为显著(P<0.05)。说明茵芍散含药血清对Wnt /β-catenin信号通路有一定的阻断作用并且与药物浓度存在着量效关系。.本项目从体内、体外两个途径证实了以清热祛湿活血立法的茵芍散的抗肝纤维化作用，初步阐释了其抗肝纤维化机制的分子机制。为中医药防治肝纤维化提供了新的理论基础和治疗手段，项目基本达到预期目标。