NT－3修饰的神经干细胞移植治疗脑性瘫痪的实验研究

小儿脑瘫患病率高，是导致患儿终生运动功能伤残疾病，目前尚无有效的治疗方法。根据脑瘫的发病机制和目前的研究现状，认为基因修饰的神经干细胞移植治疗小儿脑瘫是最新、最有前途的治疗方法之一。本课题应用携有绿色荧光蛋白报告基因和神经营养因子-3目的基因的人类免疫缺陷病毒载体转染脑源性神经干细胞，并将工程化神经干细胞移植到脑瘫幼鼠的脑内，不同时间点观察并检测幼鼠运动、感觉功能修复指标和形态学指标，最终判定神经干细胞移植对脑瘫幼鼠的修复作用。目前国内外尚无此项研究的报道。通过此项研究，为临床应用此项技术提供依据，有望在脑瘫的治疗领域有所突破。

一、项目的完成情况及取得成果概述.1. 成功体外培养及鉴定胎鼠脑源性神经干细胞。构建携带有NT-3基因的HIV载体并成功转染胎鼠脑源性神经干细胞，但是目前一直无法解决转染率较低的问题，我们通过应用Brdu标记神经干细胞来解决移植细胞的示踪问题。.2. 鼠脑瘫模型的制作及评价。（1）缺血缺氧制作乳鼠脑瘫动物模型的评价。应用一侧颈总动脉结扎结合缺氧的方法制作幼鼠脑瘫模型，从功能学①行为学（足印实验、平衡木实验）、②认知功能（水迷宫实验）、③神经电生理（运动诱发电位）和形态学（①HE染色、②免疫组化、③电镜）两方面较全面评价，通过研究证明脑瘫动物模型稳定、可靠，具有进一步的推广意义，并可用于脑瘫的相关实验研究。（2）创新性地应用孕鼠宫内感染合并缺氧造成乳鼠的动物模型制作及评价。通过研究初步证明孕鼠腹腔注射脂多糖合并缺氧造成早产脑瘫乳鼠是一种模拟人类胎儿围产期缺血缺氧的动物模型。.3. 初步证明NT-3及神经干细胞联合移植可显著促进脑瘫幼鼠神经功能的修复。本实验从神经行为学、认知功能、神经电生理学及组织病理学三个方面评价神经干细胞移植对脑瘫乳鼠的功能修复情况，研究结果提示：与对照组比较，移植的神经干细胞可促进脑瘫幼鼠神经功能的修复。.4．SCI杂志投稿并录用1篇， 国内核心医学期刊发表论文9篇；5. 研究成果参加国际学术会议交流2次；6. 培养研究生6名，4名顺利毕业，2名在读。.7．在目前研究的基础上，进行了NT-3联合NSCs移植治疗脑瘫疗效的分子机制探索和研究的预实验，并准备申请下一国家自然科学基金项目，继续进行NT-3联合NSCs移植治疗脑瘫疗效的分子机制探索和研究，如：信号转到通路、蛋白质功能等方面的探索和研究，为临床应用此项技术提供依据，有望在脑瘫的治疗领域有所突破。.二、存在的问题.1. 成功体外培养及鉴定胎鼠脑源性神经干细胞，并将携带有GFP报告基因的HIV载体转染至神经干细胞中，但是目前一直无法解决转染率较低的问题，课题组通过应用Brdu标记神经干细胞来解决移植细胞的示踪问题。.2. 不断完善神经干细胞移植治疗脑瘫的疗效评价，包括分子生物学、免疫电镜等方面的评价，进一步进行神经干细胞移植治疗脑瘫的分子作用机制探索，为临床应用此项技术提供依据。